蜘蛛兰褐斑病及病原菌鉴定和病害的药剂控制试验.pdf

摘要蜘蛛兰褐斑病的诊断及其病原菌与药剂控制试验植物病理专业硕士研究生谭舒心指导教师谭万忠摘要蜘蛛兰(Hymenocallis littoralis0acq.)Salisb,石蒜科Amaryllidaceae)是我国广泛栽培的、具有重要观赏和药用价值的一种二级保护植物。近年来,在其上发现了一种褐斑病,严重的影响了蜘蛛兰的观赏价值和经济价值。查阅现有文献,有关蜘蛛兰这种病害目前国内外尚未见研究报道。本研究通过采集重庆不同地区蜘蛛兰褐斑病病叶标本,进行了组织分离纯化、并经致病性测定、形态学及分子生物学鉴定明确致病菌、病原菌生物学特性研究、药剂的室内毒力测定,以及田间药效试验的研究,以期为制定安全经济有效的病害综合控制策略和技术措施提供科学依据。蜘蛛兰褐斑病的主要症状及病原菌的分离:该病害主要侵染蜘蛛兰叶片,病斑初期圆形、卵圆形或梭形,外缘有淡黄色晕圈,中部组织死亡呈褐色。随着时间的增长病斑呈现梭形褐色K条人斑,有时几个病斑联合,致使叶片大部分组织枯死。通过组织分离法对褐斑处进行病原菌分离纯化后,得到多个真菌菌株,根据柯赫氏证病律进行致病性测定,判定其中两个菌株为该病的病原物,分别命名为SLDl和SLD2。用这两个菌株分别接种和复合接种后均使蜘蛛兰叶片产生病斑,单独接种引致的病斑略有差异,复合接种的症状与田间植株症状相同,并从接种各发病的组织中再分离得到原来的病原菌,由此最终确认这西个菌株是引起蜘蛛兰褐斑病的病原菌,而蜘蛛兰褐斑病则是这两种病菌复合侵染而致。蜘蛛兰褐斑病菌的形态学特征与鉴定:菌株SLDl分生孢子盘生于寄主植物表皮’卜.,分散或合生,成熟后不规则开裂,浅盘状,有刚毛,褐色至暗褐色,表面光滑,至顶端渐尖。在PDA培养基上25℃培养菌落圆形,气生菌丝较发达,白色,绒毛状,边缘较整齐,7-8d 两南大学硕十学付论文后,菌落中心表面长出橘红色、具光泽且湿润的分生孢子堆,这使得整个菌落呈淡粉色。分生孢子梗较短,呈栅状排列于分生孢子盘底部,无色至褐色,基部分枝,光滑。分生孢子长椭圆形或短圆柱形,无色,单孢,分生孢子内有卜2个油球,— —。菌丝无色,分隔非常明显,-。实验室培养和田间调查未发现该病原菌的有性时期。菌株SLD2分生孢子盘杯状,散生或集生,初埋生后外露,黑色或暗褐色底层由厚壁、角状、暗褐色细胞构成,盘表面产孢区细胞壁薄,色淡。在PDA培养基上25℃培养5d菌落圆形,气生菌丝较发达,白色,短絮状,呈辐射状扩展,4-5d后菌落表面长出黑色油球状或不规则状、具光泽而湿润的分生孢子堆,呈放射状分布;随培养时间延长,分生孢子堆大量产生,有的在菌落表面联合成片。分生孢子梗较短,着生于分生孢子盘基部,无色或浅褐色, 分隔,不规则分枝。分生孢子纺锤形或倒棍棒状,—-,直或稍微弯曲,5个细胞,各细胞之间分隔均为真隔膜,两端细胞壁薄,无色,中间3个细胞呈橄榄褐色;顶部细胞无色,圆锥形,比次项部细胞直径明显变小,顶端附属丝2-3条,基部细胞无色倒圆锥形,中生式尾毛l根,约为附属丝长度的l/4。菌丝无色,分隔,—。实验室培养和田间调查未发现该病原菌的有性时期。根据上述特征,SLDl和SLD2分别属于刺盘孢属(Colletotrichum)和拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis)真菌。病原菌的分子鉴定:通过聚合酶链式反应(PCR)分别对菌株SLDI和SLD2核糖体DNA 内转录间隔区(rDNA ITS)的特异性扩增,得到了长度分别为553bp和586bp的特异性片段(GenBank登录号分别为:gQ!12圣垒至和鱼Q!12圣箜),BLAST比对后,明确SLDl的无性时期为盘长孢状刺盘孢(Colletotrichum gloeosporioides),SLD2无性时期为韦斯梅拟盘多毛孢(Pestalotiopsisvismiae)。病原菌的主要生物学特性:PDA培养基最适SLDl菌株生长,其产孢强度也最大:最适生长温度为25—30"(2,最适产孢温度为25"(2;该菌在pH 7-8范围内可较好地生长, 最适产孢;该菌对葡萄糖、麦芽糖、蔗糖三种碳源及牛肉膏、蛋白胨两种氮源利用最好,葡萄糖和牛肉膏上产孢强度大;光照时间对菌丝生长没有影响,但能抑制产孢及孢子萌发;菌丝的致死条件为60"C处理10 min;-,。 SLD2在PDA培养基上长势最好,PSA培养基上产孢量最大:最适生长温度为25-30"12, 最适产孢温度为25*(2;,其产孢强度也最大;该菌对葡萄糖、乳糖两种碳源及牛肉膏、蛋白胨两种氮源的利用效果最好,葡萄糖和牛肉膏