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PCR引物流程设计详解.doc

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PCR引物设计流程详解本文目的:复制出IL-4基因片段查找基因序列进入NCBI主页,下拉选框选择Nucleotide,在搜索栏输入要查找的目的基因,即IL-4,点击搜索2、在搜索结果选择灵长类(Homosapiens)在灵长类IL-4基因中选择需要的mRNA序列查看基因的相关信息外显子区域CDs区域点击FASTA格式,,将所得的序列复制进输入框点击搜索按钮,搜索引物设置引物设计参数(因为在之前查找基因序列的时候获知,外显子区域分别为:1-200、201-248、249-425、426-618,又知在引物设计时引物位置最好跨越一个含子,PCR产物长度通常为100-150bp,故设定上游引物位置为201-248,下游引物位置为249-425,产物长度为100-150bp)4、确认条件后,显示搜索结果双击选中得分最高的引物查看引物情况(上图为上游引物情况,下图为下游引物情况)将设计的上下游引物复制出来,,ki上获得的cDNA复制进输入框,ept接收接收后显示出该序列的相关信息

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