各国药典细菌内毒素检查法.doc

各国药典细菌内***检查法JP本法利用鲎试剂(从鲎——Limuluspolyhemus最大有效稀释倍数(MVD)指可检测出内***血细胞提取限值的供试品溶液的最大稀释倍数。或Tachypleustridentatus——物制备而来)检测由革兰氏阴性菌产生的细菌MVD按下列公式确定:内***或对内***进行定量。该检查包括两种MVD=内***限值×供试品溶液浓度/λ方法:一为凝胶法,系利用鲎试剂与内***产生凝集反应的原理;另一种为光度测定法,该内***限值:法利用鲎试剂与内***反应过程中的光学变根据剂量,注射剂的内***限度即为K/M的值,化来实现内***的测定,这种方法又可分为浊其中K为人每公斤体重可接受的内***中热原度法(基于形成凝胶的过程中,溶菌液的浊度的最小量(EU/kg),M指人用每公斤体重每小变化)和显色法(得到的肽,呈色基团复合物时的最大供试品剂量。断裂后,检测反应混合物的色度)。供试品溶液的浓度表示法:检测时,可用其中任一种方法进行试验。当测定结果可疑或有争议时,除非另有规定,以凝当内***限度以质量(EU/mg)表示时,用mg/mL胶法测定结果为准。表示浓度。试验操作过程应防止内***的污染。当内***限度以(EU/mEq)表示时,用mEq/mL表示浓度。仪器当内***限度以生物单位(EU/Unit)表示时,所有的玻璃器皿及由其他耐热材料制成的器用Units/mL表示浓度。皿需用已验证的工艺在热烘箱内进行去热原处理。去热原时,常用的最小时间和温度设置当内***限度以体积(EU/mL)表示时,用mL/mL分别为30分钟和250?。若使用塑料器械,如表示浓度。微孔板和微量进样器配套的吸头等,它们必须λ:指凝胶法中鲎试剂的标示灵敏度(EU/mL),标明无内***并确对试验无干扰。或为浊度法或显色法使用的标准回归曲线上内***储备标准溶液的制备最低点(EU/mL)的对应值。以BET检查用水溶解内***10000对照标准品凝胶法或内***100对照标准品,制取细菌内***试凝胶法系通过鲎试剂与内***产生凝集反应验(BET)的内***储备标准溶液。内***的的原理来检测或定量内***的方法。为确保试量用内***单位(EU)表示。1EU相当于1个验结果精确、有效,应根据预备试验中的说明)。内***国际单位(1U开展试验,复核鲎试剂的标示灵敏度和试验的内***标准溶液的制备干扰因素。充分混合内***储备标准溶液后,用水稀释,(1)预备试验即得BET检查用内***标准溶液。得到的稀释(i)鲎试剂的标示灵敏度复核试验液应尽快使用,以免因吸附而导致活性损失。在规定的条件下,使所用鲎试剂产生凝集的内供试品溶液的制备***的最低浓度即为该鲎试剂的标示灵敏度。除非另有说明,以BET检查用水溶解或稀释药当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任品来制备供试品溶液。药用容器内盛放的供试何可能影响检验结果的改变时,应进行鲎试剂品溶液的制备方法见其他具体规程。如有必灵敏度复核试验。按照下述步骤开展试验。要,调节待测溶液的pH值,使鲎试剂和供试品溶液的混合物的pH值在所选鲎试剂的使用用BET检查用水稀释内***储备标准溶液,制pH范围内。一般要求供试品溶液的pH值范围成2λ、λ、——。试液或调节pH值用溶液应用溶液。用BET检查用水或适当的缓冲液溶解鲎BET检查用水配制,在去除内***的容器中贮试剂,得到鲎试液。在每支试管中,分别混合存。等体积()的鲎试液和标准溶液。如使用的是装有鲎试剂冻干粉末的西林瓶或确定最大有效稀释倍数安瓿,可向其中直接加入溶液。装有反应试剂混合物的试管(或西林瓶或安瓿表1之类的容器)通常在37?1?下保存60?2分溶内毒稀释稀稀释后平行钟,在此过程中,要避免试管的振荡。保温结液素浓剂释内***管数束后,为测试凝胶的完整性,缓缓将每个容器度/配倍的浓度0倒转180。如果形成了坚实的凝胶,倒转后凝制内数胶不移位,此时将该项检查的结果记录为阳***性。如未能形成凝胶,或形成的凝胶不坚实、的溶在倒转过程中出现了滑脱,该项检查的结果即液为阴性。A0/供,,,4试验时,每一个浓度的标准溶液平行做4管。,试验方为有效。如试验无供试品溶21λ效,确认试验条件后,重复该试验。***。使用下面的公式,C2λBET12λ2计算终点浓度的几何平均值:/BET检查21λ-,lg(Σe/f),所用系列溶液的终点浓度的对数值的和D0/BET,,,2f,