小反刍兽疫病毒H蛋白在家蚕杆状病毒表面展示及其免疫原性研究.doc

小反刍兽疫病毒H蛋白在家蚕杆状病毒表面的展示及其免疫原性的研究(可编辑)小反刍兽疫病毒H蛋白在家蚕杆状病毒表面的展示及其免疫原性的研究浙江理工大学学位论文原创性声明本人郑重声明:我恪守学术道德,崇尚严谨学风。所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已明确注明和引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写,我对所写的内容负责,并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名:磺者复同期:,年印月同\浙江理工大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅或借阅。本人授权浙江理工大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口,在年解密后使用本版权书。本学位论文属于不保密只?/网哑型指导教师签名:学位论文作者签名:兹奢笺月同期:弘『年月?日期:??:堡垒坠坠璺』苎虽竖堡量坚鱼星坠照乜垒竺璺丝坠笪宝墨垦坠坐望垒望墨望墨丛旦磐垒坚坠望【宝望垒望垡墨幽墅坠旦旦望盟?望堕’:丛亟丛卫啦::丕盆墼至旦:丕丛:旦星啦墨鱼丛坠銎旦:.单位代码墨墨璺研究生学号浙江理工大学硕士学位论文摘要,,是由小反刍兽疫病毒小反刍兽疫,己起的一种接触性、急性、烈性类传染病,主要感染小反刍动物,目前主要通过疫苗来预防该病的发生。糖蛋白是基因编码的糖蛋白,预测分子量为。该蛋白是小反刍兽疫病毒的主要抗原,能够诱导机体产生保护性的中和抗体。杆状病毒表面展示系统是近几年发展起来的一种新的真核展示系统,通过在病毒衣壳蛋白插入外源肽、二者融合表达或与特异性的锚定部位结合,在病毒表面进行融合表达而筛选出目的活性肽或蛋白。利用该系统可将表面表达有抗原蛋白的整个重组病毒作为免疫原或者疫苗接种动物进行免疫保护,与传统的疫苗制备方法相比免去了繁琐的抗原蛋白的纯化工作。本研究通过杆状病毒表面展示技术将糖蛋白展示于病毒表面以研究其用于制备疫苗的可行性。首先,通过递归技术,我们合成了~段自『后分别融合信号肽和跨膜区编码序列的融合基因,即信号肽一载体一跨膜序列。然后,将陔片段插入到上构建了重组转移载体。将该重组转移载体转化细胞,经蓝白斑筛选获得重组.,鉴定该含有目的基因。用该转染家蚕细胞获得重组病毒.。。,获得抗体效价为:,血清中和实验测得中和效价为:,.,,具有良好的免疫原性。本研究证实了利用家蚕杆状病毒表面展示技术可有效在病毒表面展示蛋白,这为制备新型小反刍兽疫疫苗奠定了基础。关键词;家蚕杆状病毒表面展示技术;重组杆状病毒.;免疫原性检测浙江理工大学硕士学位论文.,,,、.,,’,,.,./,、.,,.,./,,..?,.../?...,./,:,:,浙江理工大学硕士学位论文...,.:?;/;;浙江理工大学硕士学位论文目录摘要.??.?.缩略语??.?第一章文献回顾?。?......??.小反刍兽疫病毒及其蛋白综述?.杆状病毒表达系统综述..家蚕/表达系统...?系统....杆状病毒表面展示系统~.展望第二章实验方案设计夏,~~~~~~~~~~~和意义~~~~~~~~~~~~~~~一一一一一一一一一一一一乙~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~一一一一一一一一?乙研研实究究验目内流的容科~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~?一一一一第三章生物信息学分析?.生物信息学:具?。.方法??..结果??...蛋白生物信息学分析结果?..生物信息学分析结果?..讨论??....材料..??...质粒扩增?/....碱裂解法制备小量质粒..目的基冈的扩增??....载体的双酶切产物和..连接反应??....感受态细胞的制备浙江理工大学硕士学位论文..连接产物的转化??....阳性克隆的筛选与鉴定??...结果??....基冈扩增..跨膜序列扩增?..基冈与跨膜序列的连接与扩增...信号肽..跨膜序列扩增??一...??.?.材料与试剂...材料..??...感受态细胞的制备..重组质粒转化凶株...挑取单克隆?。..重组的小鼙制各..重组鉴定。..细胞复苏??。..细胞冻存??~....病毒扩增??