小尾寒羊骚痒病单抗制备及免疫组化检测方法初步建立.doc

小尾寒羊骚痒病单抗制备及免疫组化检测方法的初步建立小尾寒羊骚痒病单抗制备及免疫组化检测方法的初步建立中国农业科学2006,39(4):819—824ScientiaAgriculturaSinica——小尾寒羊骚痒病单抗制备及免疫组化检测方法的初步建立张永强1..,吴晓东2刘雨田2张海涛,,王志亮2鲍恩东('南京农业大学动物医学院,南京210095:农业部动物检疫所/国家外来动物疾病诊断中心,青岛266032)摘要:【目的】通过表达羊PrP核心片段,单抗制备,最后建立免疫组织化学检测羊痒病方法.【方法】用PCR方法从小尾寒羊基因组DNA中扩增编码PrP核心片段DNA,并克隆到硫氧还原蛋白融合表达载体pET一32a(+)上,转化至EcoliBL21,,利用淋巴细胞杂交瘤技术,制备羊核心片段单克隆抗体.【结果】通过上述方法,得到相对分子质量约为35kD的重组小尾寒羊PrP核心片段,,其中4株可特异性识别羊痒病脑组织切片中耐PK酶消化的PrP,经5次重复试验表明:所制备单抗与对照单抗F89结果完全一致.【结论】利用原核表达,单抗制备等技术制备出PrP特异性单克隆抗体,:小尾寒羊;痒病;单抗;?,,,',,(CollegeofVeterinaryMedicine,NanjingAgriculturalUniversity,Nanfing210095;enterforExoticAnimalDisease/NationalAnimalQuarantineInstituteofMinistryofAgriculture,Qingdao266032)Abstract:[Objective]ThemethodofimmunohistochemistryassayforthedetectionofScrapiebymonoclonalantibodyWasestablished.[Method],,monoclonalantibodieswereobtainedtodetectScrapiebyimmunohistochemistry.[Result]binantproteinofCOrepartofovinePrPWas0btainedandapanelofsixhybridomacelllinessecretingspecificantibodiestocorepartofPrPrelatedtoScrapiewereestablishedfromonefusionbetweenmyelomaSp2/.[:Ovine;Scrapie;Monoclonalantibody;Immunohistochemistry0引言【本研究的重要意义】传染性海绵状脑病(transmissiblespongiformencephalopathies,TSE)是存在于人类和动物界的一类中枢神经系统慢性退化性致死性疾病,(scra