小鼠Runt相关转录因子2 RUNX2-ELISA试剂盒说明书.doc

小鼠Runt相关转录因子2(RUNX2)-ELISA试剂盒说明书小鼠Runt相关转录因子2(RUNX2)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书产品编号:E-EL-M1030(本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!)声明:尊敬的客户,感谢您选用本公司的产品。本产品选用世界著名生产厂家的原料,采用专业ELISAkit生产技术制造。适用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清液中天然和重组RUNX2浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分~如有疑问,请及时联系伊莱瑞特生物科技有限公司。试剂盒组成:名称-中文名称-英文规格保存条件MicroELISAPlate8×12/8×6*ELISA酶标板4?ReferenceStandard冻干标准品2/1支*4?ReferenceStandard&SampleDiluent标准品&样品稀释液1瓶20mL/12mL*4?ConcentratedBiotinylatedDetectionAb浓缩生物素化抗体1支120μL/70μL*4?DiluentforBiotinylatedDetectionAb生物素化抗体稀释液1瓶10mL/6mL*4?ConcentratedHRPConjugate浓缩HRP酶结合物1支120μL/70μL*4?(避光)DiluentforHRPConjugate酶结合物稀释液1瓶10mL/6mL*4?浓缩洗涤液(25×)ConcentratedWashBuffer(25×)1瓶30mL/16mL*4?SubstrateReagent底物溶液(TMB)1瓶10mL/6mL*4?(避光)StopSolution反应终止液1瓶10mL/6mL*4?PlateSealer封板覆膜5/3张*ProductDescription产品说明书1份*:[96T/48T](打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整)检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠RUNX2抗体包被于酶标板上,实验时标本或标准品中的RUNX2会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠RUNX2抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠RUNX2抗体与结合在包被抗体上的小鼠RUNX2结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色,加终止液后变黄。用酶标仪在450nm波长处测OD值,RUNX2浓度与OD值之间呈正比,通过绘制标准曲线求出标本中RUNX2的浓度。450标本收集::全血标本于室温放置2小时或4?过夜后于1000×g离心20分钟,取上清即可检测,收集血液的试管应为一次性的无热原,无内***试管。:,标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟,取上清即可检测。避免使用溶血,高血脂标本。:用预冷的PBS(,pH=)冲洗组织,以去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样本对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。:取细胞培养上清于1000×g离心20分钟,除去杂质及细胞碎片。取上清检测。:1000×g离心20分钟,取上清即可检测(具体处理方法可参考:),悬浮物应离心去除。,请按一次使用量分装,冻存于-20?/-80?冰箱内,避免反复冻融,1-6月内检测,4?保存的应在1周内进行检测。,请根据实际情况,做适当倍数稀释(建议先做预实验,以确定稀释倍数)。试验所需自备物品:(450nm波长滤光片),EP管及一次性吸头:-10μL,2-20μL,20-200μL,200-?恒温箱,:,平衡至室温。(1:25)。未用完的放回4?。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象,可用40?水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液(加热温度不要超过50?,使用时洗涤液应为室温)。:加入标准品&,静置10分钟,待其充分溶解后,轻轻混匀(浓度为20ng/mL)。然后根据需要进行倍比稀释(注:不要直接在反应孔中进行倍比稀释)。建