光周期对飞虱虫疠霉离体培养的生物量及其产孢节律的影响.doc

光周期对飞虱虫疠霉离体培养的生物量及其产孢节律的影响()菌物系统174:349,355,1998Mycosystema光周期对飞虱虫疠霉离体培养的生物量及其产孢节律的影响徐均焕冯明光()浙江农业大学生物科学系,杭州310029()摘要飞虱虫疠霉Pandoradelphacis是侵染飞虱和叶蝉等重要作物害虫的昆虫病原真菌。通过在液体及平板培养中研究光周期对菌丝及菌落生长量、产孢节律和产孢量的影响,作者发现光照对液培菌丝的营养生长无显著影响,但长光照液培菌丝的产孢延迟并且产孢量减少,而全黑暗液培菌丝产孢早且产孢量大。但是,光照明显促进全黑暗下液培菌丝的产孢。在平板培养中,长光照能促进菌落生长和产孢;半光照半黑暗虽有利菌落生长,但产孢量很低;光照9h和18h产孢量较大,但菌落生长较小。无论液体还是平板培养,飞虱虫疠霉均生长良好,但建议在全黑暗条件下进行液体培养,在长光照下进行平板培养。关键词飞虱虫疠霉,虫霉,光周期,液体与平板培养,(()飞虱虫疠霉PandoradelphacisHoriHumber,同物异名包括Entomophthoradel2())()phacisHori,EryniadelphacisHoriHumber是重要的昆虫病原真菌虫霉目?虫霉科,1,4能感染飞虱、叶蝉及蚜虫等重要粮食及经济作物害虫并引发流行病。在杀虫微生物5中,虫霉菌最常见引发高强度的害虫流行病,因为其分生孢子能主动弹射至几厘米远处而在虫尸周围形成孢子晕圈,会感染在此范围内活动的寄主并引起死亡,继而又产孢子扩大感染范围而引起流行病。光照对不同虫霉菌产孢和菌丝生长影响的研究报道较1,2,6,9多,但结果因种而异,颇不一致。光照可能刺激产孢,亦可能抑制产孢,对菌丝的生长也是如此。,为数有限的报1,10道多限于描述性记载。蔡保灵曾利用外国人提供的菌种研究过该菌离体培养条件11下的产孢量,但其产孢规律及其影响因子未见有过报道。本研究利用最近在国内首次2,3分离获得的纯培养飞虱虫疠霉菌株,通过对该菌生物学特性及其培养性状的研究,揭示光照对其生长及产孢规律的影响。()()国家杰出青年科学基金39525004和浙江省自然科学基金396283资助。1997211206收到原稿,1998204230收到修改稿。()所用飞虱虫疠霉菌株F95128,自杭州自然病死的褐稻虱NilaparvatalugensSt…l虫尸中分离纯化3()而得。菌种接种于萨氏2牛奶2蛋黄2琼脂SEMA培养基上,在温度为15?,光周期为L12?D12的培养箱中继代培养保存。(上述菌种用SEMA在24?下培养6d,将菌落刮入萨氏葡萄糖液体培养液SDY,每公升葡萄糖())40g,蛋白胨10g,酵母浸出粉10g,另加PSNantibioticmixture20U/mL中振荡培养100r/min3d制成(()母液。),置于温度为28?、光周期分别为L0?D24、L3?D21、L6?D18,L9?D15、L12?D12、L15?D9、()L18?D6、L21?D3和L24?D0的条件下振荡培养100r/min。,滤纸过滤,在60?下烘4小时,取出后天平称重,减去滤纸重即为菌丝干重,连续测定4d。()%水琼脂平板<56mm上,用无菌滤纸吸去多余水份,倒置培()养于24?、日光照12h的培养箱中,在皿盖中央放置一盖玻片20×20mm收集自上方弹射降落的分生孢子,每处理重复3次。每隔3h更换盖玻片,将载有孢子的盖玻片在200倍光学显微镜下随机观察记2(),用以估计产孢量,共观察60h。()此外,将在完全黑暗条件L0?D24下振荡培养的同一瓶菌液按上述取样方法涂皿,在24?及上述不同光周期的培养箱中培养,每处理5次重复,每隔8h更换盖玻片镜检产孢量,共观察96h。。取菌落移接于SEMA平板培养基中()央<56mm,分别置于温度为24?、上述9种光周期的生长箱中培养,每处理5次重复。,每处理5次重复,连续测量4d。,每日更换。对取下的盖玻片按上述相同方法镜检孢子量。