细胞计数方法------细胞计数板法.docx

细胞计数方法------细胞计数板法.docx细胞计数方法……细胞计数板法实验原理:当待测细胞悬液中细胞均匀分布时,通过测定一定体积悬液中的细胞的数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。具体操作:将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板。将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间,静置3mim注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算:细胞数/mL=B大格细胞总数/4X1()4个/ml(注:当细胞很多时,可在四个格小选一•定数口较平均的小格,由于每大格小有16个小格,然后计左侧和上方的细胞数,求岀每小格的细胞数,取平均值m,mX16即每个格的平均值。所以,细胞密度=mX16X104个/ml)说明:公式小除以4,因为计数了4个大格的细胞数。公式中乘以IO。因为计数板中每一个大格的体积为:(长)(宽)(高)='而lml=1000ul=1000mm'(注意:镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。)细胞计数板的使用血球计数板•基本构造血球计数板是一块特制的厚型载玻片,载玻片上冇四个槽构成三个平台。屮间的平台较宽,其中间乂被一短横椚分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网,每个方格网共分九个大格,屮央的一大格作为计数用,称为计数区。计数区的刻度有两种:一种是计数区分为16个大方格(大方格用三线隔开),而每个大方格又分成25个小方格;另一种是一个计数区分成25个大方格(大方格Z间用双线分开),而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造,它们都有一个共同特点,即计数区都由400个小方格组成。jfc邙峠孜皈对旳筑计数区边长为1mm,则计数区的面积为1mm2,每个小方格的面积为1/400mm2o盖上盖玻片后,,,每个小方格的体积为1/4000mm3o使用细胞计数板计数时,先要测定每个小方格中微生物的数量,再换算成每毫升菌液(或每克样品)中微生物细胞的数量。细胞计数板•使用方法视待测菌悬液浓度,加无菌水适当稀释(斜面一般稀释100倍),以每小格的菌数可数为度。取洁净的细胞计数板一块,在计数区上盖上一块盖玻片。将菌悬液摇匀,用滴管吸取少许,从计数板屮间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴(不宜过多),让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区,勿使气泡产生,并用吸水纸吸去沟槽屮流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上(不要使计数区两边平台沾上菌悬液,以免加盖盖玻片后,造成计数区深度的升高),然后加盖盖玻片(勿使产生气泡)。静置片刻,使细胞沉降到计数板上,不再随液休漂移。将细胞计数板放置于显微镜的载物台上夹稳,先在低倍镜下找到计数区后,再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近,观察时应减弱光照的强度。计数时若计数区是出16个人方格组成,按对角线方位,数左上、左下、右上、右卜•的4个大方格(即100小格)的菌数。如杲是25个大方格组成的计数区,除数上述四个大方格外,述需数屮央1个大方格的菌数(即80个小格)。为了保证计数的准确性,避免重复计数和漏记,在计数时,对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定。如菌休位于