人5, 6-EET酶联免疫分析.docx

人5, 6-EET酶联免疫分析.docx:..人5,6-EET酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: ・20p0ml使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中5,6-EET含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人5,6-EET水平。用纯化的人5,6-EET抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入5,6-EET,再与HRP标记的5,6-EET抗体结合,形成抗体•抗原■酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的5,6-EET呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人5,6-EET浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20mlX1瓶7终止液6mlX1瓶2酶标试剂6mlX1瓶8标准品(32pg/ml),提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于・20°C保存,&N3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。16pg/ml5号标准品150^1的原倍标准品加入150川标准品稀释液8pg/ml4号标准品150(11的5号标准品加入150|il标准品稀释液4pg/.加样:分別设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50卩1,待测样品孔中先加样品稀释液40川,然后再加待测样品lOpl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。:用封板膜封板后置37°C温育30分钟。::小心揭掉封板膜,弃去液体,甩T,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。:每孔加入酶标试剂50卩1,空白孔除外。:操作同3。&洗涤:操作同5。:每孔先加入显色剂A50pl,再加入显色剂B50yl,轻轻震荡混匀,37°:每孔加终止液50)11,终止反应(此时蓝色立转黄色)。:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内