实验五影响酶活力的因素.doc

实验10影响酶活力的因素——正交实验法(碘量法测定酶活力)四个班,每班分16组两个同学一组目的要求:初步掌握正交实验设计法(简称正交法)的使用,运用正交法测定底物浓度、温度和pH这三种因素对酶活力的影响。实验原理:酶反应受到多种因素的影响,如底物浓度、酶浓度、温度、pH值、激活剂和抑制剂等都能影响酶的反应速度。这种多因素的实验可通过正交法即用—特制的表格——正交表来安排试验,计算和分析实验结果。这样就能通过少量实验取得较好的效果。实践证明正交法是一个多、好、快、省的方法,目前已广泛用于农业生产和科学实验中。本实验运用正交法测定酶浓度、温度、PH值这三个因素对酶活性的影响,并求得在什么样的底物浓度、温度和pH值时酶的活性最大。酶活力用硫代硫酸钠滴定法测定。过氧化氢酶能把过氧化氢分解成水和氧,其活力大小以一定时间内一定量的酶所分解的过氧化氢量来表示。被分解的过氧化氢量可用碘量法间接测定。当酶促反应进行一定时间后,终止反应,然后以钼酸铵做催化剂,使未被分解的过氧化氢与碘化钾反应放出游离碘,再用硫代硫酸钠滴定碘。其反应为:H2O2+2KI+H2SO4→I2+K2SO4+2H2OI2+Na2S2O4→2NaI+Na2S4O6反应完后,以样品溶液和空白溶液的滴定值之差求出被酶分解的过氧化氢量,即可计算出酶的活力。实验器材:试管15毫升试管9*16=144支吸管1毫升2*16=32支吸管5毫升2*16=32支吸耳球16个漏斗1个研钵(或者搅碎机)1个(1台)恒温水浴锅3台铁架台16个蝴蝶夹16个酸碱两用滴定管16个100毫升的三角烧瓶3*16=48个烧杯500毫升18个(装好水放到恒温水浴锅里)实验所需药品:,每班需16ⅹ50=,用蒸馏水定容至1000毫升。(用带盖白色试剂瓶分装10瓶。分装1000毫升即可,其余3000用白色大试剂瓶装好备用)(每组消耗50毫升,每班需16ⅹ50=800毫升)共配4000毫升95毫升浓硫酸,用蒸馏水定容至1000毫升。(用带塞白色试剂瓶分装10瓶。分装1000毫升即可,其余备用)%钼酸铵溶液(每组需30滴,每班需16ⅹ30=480滴)共配500毫升20克钼酸铵,少量蒸馏水溶解,用蒸馏水定容至200毫升(用带胶头滴管的白色试剂瓶分装10瓶。)(每组消耗50毫升,每班需16ⅹ50=800毫升,配置6000毫升),蒸馏水定容至1000毫升。(用带胶头滴管的白色150毫升试剂瓶分装10瓶,分装1000毫升即可,其余备用)%的淀粉溶液(每组需50滴,每班共需16ⅹ50=800滴,每班需200毫升,实验临用前配置)2克淀粉,加入50毫升开水完全溶解,后用蒸馏水定容至200毫升。(用带胶头滴管的白色试剂瓶分装6瓶)%的碘化钾溶液(每组需12毫升,每班共需16ⅹ12=192毫升)共配1000毫升200克碘化钾溶解于少量蒸馏水中,蒸馏水定容至1000毫升。(用棕色容量瓶配,用带塞棕色50毫升试剂瓶分装,分装10瓶)---盐酸缓冲液A液:,再用蒸馏水定容至1000毫升B液:/