实验六果蝇唾液腺染色体的观察及制备.doc

专业班级:09生物技术2班学号:姓名:赵丽同组人:龙雨跃实验日期:2011年10月11日室温:℃大气压:。。。二、原理蝇、摇蚊幼虫唾液腺细胞中的巨大染色体。双翅目昆虫的唾液腺细胞发育到一定阶段之后就不再进行有丝分裂,而永久停留在分裂间期。但随着幼虫的生长,唾液腺染色体仍不断地进行自我复制而且不分开,经过许多次的复制形成约1000—4000拷贝的染色体丝,合起来直径达5μm,长度达400μm,比普通细胞中期染色体约大100~150倍,所以又称为多线染色体(polytenechromosome)或巨大染色体(giantchromosome)。唾液腺染色体的另一特点是体细胞中同源染色体处于紧密配对状态,这种状态称为“体细胞联会”。在以后不断的复制中仍不分开,由此成千上万条核蛋白纤维丝唾液腺染色体(salivaryglandchromosome)是一类存在于双翅目昆虫,如果结合在一起,紧密盘绕。所以细胞中染色体只呈单倍数。黑腹果蝇的染色体数目2n=8其中第Ⅱ、第Ⅲ染色体为中部着丝粒染色体,第Ⅳ染色体和第IX染色体为端着丝粒染色体。唾液腺染色体形成时,染色体着丝粒和近着丝粒的异染色质区聚于一起形成一个染色中心(chromo-center),所以在光学显微镜下可见从染色中心处伸出6条配对的染色体臂,其中5条为长臂,l条为紧靠染色中心的很短的臂。唾液腺染色体经染色后,呈现深浅不同,疏密各异的横纹(band)。这些横纹的数目,位置,宽窄及排列顺序都具有物种的特异性。研究认为这些横纹与染色体的基因是有一定关系的。通过一定的实验方法使果蝇唾液腺染色体各臂分散开,并且使带纹、膨突等特征不受杂质影响清晰地显示出来,,、粗细各异的磺纹(band),,果蝇唾液腺染色体近几十年来,已广泛用于种内系统发生和种间亲缘关系的研究中,因为种间及种内不同品系和近缘种中的遗传差异经常反映在唾液腺染色体的不联会、形成泡(puff)、缢虞(constriction)和间带区的伸缩性以及顶体(telomere)的形态等多方面的差异,而特别重要的是研究它的基因序列的差异(观察是否产生了例位以及染色体的断裂、融合和重排).因此,无论从细胞遗传学的角度研究基因与突变性状之间的联系,还是从进化遗传遗传学方面研究染色体的系统发生,探讨种间以及近缘种间的遗传差异和生殖隔离的机制等,,而一旦染色体上发生了缺失,重复,倒位。易位等结构变化,也可较容易地在唾液腺染色体上观察识别出来。三、仪器设备及材料,试济仪器设备:解剖镜,显微镜,恒温培养箱,镊子,解剖针,载玻片及盖玻片,吸水纸解剖镜,显微镜,恒温培养箱,镊子,解剖针,载玻片及盖玻片。材料:黑腹果蝇(Drosophilamelanogaster)三龄幼虫试剂:醋酸洋红液,蒸溜水,浓盐酸五、 发育充足、肥大的三龄幼虫,唾液腺和唾液腺细胞发育良好。利用这样的唾液腺细胞才能制备出理想的染色玻片标本。因此要求培养基营养丰富,含水量较高。比较松软,发酵良好。,选择行动迟缓、肥大、爬在管壁上即将化蛹的三龄幼虫,或者选择经低温处理的果蝇三龄幼虫置于载玻片上。如果分不清头尾着可以从它爬行的时候确认其头尾,由于果蝇的唾液腺位于幼虫体前1/3-1/4处,所以在解剖镜下左手持解剖针按压住幼虫后端1/3处。固定幼虫,右手持解剖针扎住幼虫头部口器处,适当用力向后拉,把头部与身体拉开,唾液腺腺体随之而出。把载玻片移到显微镜下查找唾液腺。果蝇的唾液腺是位于口器后端神经节两侧的一对透明而微白的类似香蕉形的长形小囊,由单层细胞构成。细胞大,细胞核大,细胞轮廓清晰。。:将唾液腺放于低浓度的Nacl溶液中处理10-15min,以使细胞充分吸水而容易弄破。,让唾液腺在lmol/LHCI中解离2-3分钟,以松软组织,利于染色体分散。--3次后滴2滴品红染液染色20分钟(解剖和染色过程勿使腺体于燥)。在酒精灯上加热以增强染色效果。可以不经解离一