第七组液相色谱-核磁共振联用技术在药物分析中的应用.doc

药物分析课程论文综述液相色谱-核磁共振联用技术在药物分析中的应用药学2011级(2)班刘星明()张婷()林敏燕()刘培能()指导教师:周漩2014年6月摘要液相色谱(LC)是分离各种未知混合物的高效能的物理分离技术,核磁共(NMR)是结构分析的强有力手段。液相色谱–核磁共振(LC-NMR)联用技术能达到快速分离、结构鉴定并且定量分析的目的,该技术在药物分析中的应用非常广泛,具有广阔的应用前景。本文主要对LC-NMR联用技术在化学药物分析(包括未知杂质的结构分析、混合物中已知成分的定量分析)、中药物分析(包括异构体分析、新化合物的结构鉴定),天然产物,代谢产物分析中的应用进行详细的综述。关键词:生物碱;中药材;含量测定前言液相色谱-核磁共振谱联用技术(LC-NMR)的尝试始于20世纪70年代末,但直到90年代中后期才发展得较为成熟并且得到推广使用。而随后从确定菊科植物Zaluzaniagrayana的粗提物中倍半萜内酯成分的结构开始,LC-NMR在天然产物分析中逐渐显示出高效、快速、微量的优势。现 由于LC- NMR一体化联用技术能一次性完成从样品的分离纯化到峰的检测、 结构测定和定量分析, 提供大量分子结构和混合物组成的信息, 提高了研究效率和灵活性, 因此引起人们的广泛关注,现已成为目前用于天然产物研究的一种新型分析手段,。随着对药品分析要求的提高,LC-NMR又与质谱(MS)等技术联合,发展成了LC-SPE-NMR联用、LC-MS-NMR联用,实现优势互补,在混合物成分的结构鉴定中具有不可替代的作用。LC-NMR联用技术包括连续流动(on-line)和停止流动(off-line)两种模式。LC-NMR在混合物尤其是未知物的结构鉴定中的应用已经越来越广泛。在药物分析的领域:有机小分子药物的鉴别、定量,生物大分子类生化药物的结构研究;对药物的体外评价与研究、对体内药物的监控与研究等也有广泛使用。本文主要阐述本文综述LC-NMR联用技术在分析化学药、中药药物分析,天然产物分析,代谢产物分析的应用。-NMR联用技术在分析未知杂质时,无需纯品做对照,不产生破坏性,具有专属性强、快速、准确、精密度好等优点。为混合物的即时分离、鉴定提供了一种简便、快速、准确的方法。检测药物中的杂质是这一技术应用领域之一。杨春[1]等用高效液相色谱-核磁共振(M)联用技术中的连续流动和停止流动两种模式对萘哌地尔中杂质进行检测。所有的高效液相色谱采用Varian公司的Prostar-230高效液相色谱仪,分析柱为InertsilODS-3柱(.
250mm,5
m),萘哌地尔样品用乙***溶解,浓度为5g/L。连续流动的进样量为20
L,停止流动的进样量为50
L。检测器为VarianProstar-330二极管阵列检测器,紫外检测波长为210nm。HPLC分离条件为乙***
磷酸缓冲溶液=65
35(~)。所有的图谱均在INOVA-500核磁共振仪上完成。HPLC-NMR采用反相60
L流动探头。WET脉冲序列抑制乙***和重水的溶剂峰,同时抑制乙***的卫星峰。在没有纯品的对照下,根据1HNMR,1H-1HCOSY谱完成了主要杂质1-萘环-丙三醇结构鉴定。联用技术同时能得到化合物的UV、NMR、MS信息,为化合物分析提供了全面的信息。孙煌[2]等应用HPLC-MS/MS/核磁共振(1H-NMR/13C-NMR/HMBC)技术,对多索茶碱及其未知杂质进行结构分析,首次发现并确定多索茶碱未知杂质的结构。采用InertsilODS-3(,×150mm,迪马公司),流动相为乙***-水(82:18),进样量为10μl,通过ESI与LC相联采用全扫描一级质谱及全扫描二级质谱同时测定。通过多索茶碱对照品及茶碱对照品确定未知杂质,通过其产物离子推测,该未知杂质为多索茶碱的同分异构体1,3-二***-9-(1,3-二氧环戊基-2-基)***-3,9-二氢-1H-嘌呤-2,6-二***。采用联用技术已经证明是一种有效的研究工具,特别是在药物研发、生产过程中。,因此,不需要引进任何校正因子,不需要为每一种被测物选择相应的标准品。LC-NMR广泛应用于有机化合物的定性分析,它在化合物纯度定值含量测定中也具有很多优势,现已经广泛应用于药物合成及生产中。《美国药典》规定使用定量NMR法,以苯甲酸苄酯为内标物,进行亚***戊酯的定量分析。此外,LC-NMR法还应用于多种药物的副产物或降解产物含量测定,具有快速、简便、专属性高的特点;与其他方法相比,有不破坏样品,信号峰不会发生重叠等优势[3]。柳娜[4]等采用HPL