第三章酶促反应动力学.doc

:①Lineweaver-Burk法:米氏方程可变形为,以作图,将得一直线,直线截距为,斜率为,据此计算。此法由于采用两个独立变量和,底物浓度很低时,反应速率也很低,取倒数,误差较大。②HanesWoolf法:米氏方程可变形为,以作图,将得一直线,直线截距为,斜率为,据此计算。此法在底物浓度很低时误差较小。③EadieHofstee法:米氏方程可变形为,以作图,将得一直线,直线截距为,斜率为,据此计算。上述方法的共同点,是要从动力学实验中获取不同的CS值和r值。而r不能由试验直接取得,试验中能直接得到的是不同时间t时的浓度CS值(或CP值)。为此需要根据速率的定义式,在CS~t的关系曲线上求取相应各点切线的斜率,才能确定不同时间的反应速率r。这种求取动力学参数的方法又称之为微分法。显然,用这种微分法作图求取反应速率会带来较大的误差。④积分法。米氏方程积分后可变形为以作图,将得一直线,直线斜率为,截距为。因此直接采用动力学实验中测得的时间t、底物浓度CS数据作图,即可求取动力学参数值。:酶催化水解反应机制为采用稳态法推导反应动力学方程:解之,得式中,,:(1)酶的稳定性受温度和时间的双重影响,其函数表达式为图2-11清楚地表明了温度和时间对酶稳定性的双重影响。在同一温度下,不同的保温时间残存酶活力有极大差异。图(a)中不同温度下保温10min后残余酶活力曲线只表明,在保温时间为10min时,酶在50°C以下是稳定的,而并不能得出“酶在50°C以下是稳定的”这一结论。因为不同的保温时间必将对酶的稳定性产生影响。(2)一定的酶促反应都是由正向的酶促反应与酶的失活反应的复合。当时间一定,随温度的升高,反应速率增大,转化率提高,但当温度高于某一值时,由于酶的热失活速率加快,当快于酶促反应速率上升的速度时,酶的总反应速率下降,最终降为零。对某一反应时间,就有一与最高转化率对应的温度,该温度称为最适温度。不同的反应时间,有不同的最适温度。最适温度是温度对酶促反应速率和酶失活速率双重作用的结果。如图2-12所示。图(b)只表明反应时间为10min时,酶的最适反应温度为35°C。但并不能笼统地说酶的最适反应温度为35°C。因为如果反应时间变化,酶的最适反应温度将发生变化。,酶的失活又受温度和时间的双重影响。因此不同的反应时间,有不同的最适温度。当反应时间较长时,在较低的温度下即可达到短时反应较高温下所能达到的同样的失活速率,从而引起酶最适温度的降低。通常连续式操作比分批式操作时间长,因此,其最适反应温度比分批实验的要低。:可逆酶促反应机制为采用稳态法推导动力学方程(1)(2)(3)解之,得(4)令,,,(5)则,(6)设平衡状态时底物浓度为,产物浓度为,平衡常数为。有(7)达到平衡时,,即=0(8)化简,得,(9)故,(10)因反应为单分子反应,故(11)令(12)将(10)、(11)、(12)式代入(6)式,得式中::酶在载体表面固定化,因此固定化酶的效率因子为外扩散效率因子。:分配系数KP的定义是载体内外底物浓度之比