糖化酶与生产流程设计与方案.docx

糖化酶的生广流程设计方案糖化酶即葡萄糖淀粉酶(1,4-a-葡聚糖葡聚糖水解酶,), 是淀粉糖化工艺的主要酶类,被广泛地应用于食品、医药、发酵等工业。目前,糖化酶的生产菌种主要为黑曲霉。根据使用的生产菌种不同及发酵工艺不同,工业生产中,糖化酶的发酵生产水平在35000〜55000UPmL不等。糖化酶的工业化生产从过去的固体发酵沿革到上世纪 90年代初,液体发酵工艺逐步取代了原固体发酵工艺。液体发酵工艺的建立与应用极大地改善了发酵产品质量并大幅度提升了糖化酶的发酵生产水平。但现有糖化酶发酵生产技术共同存在不足之处,其中种子制备周期和发酵生产周期很长是一个较突出的问题,如实验室的种子制备需要15d以上,发酵周期通常200h以上。生产流程图试验菌种的分纯1、培养基(1)固体培养基,察氏培养基+1%酵母膏+1%蛋白月东;(2)初筛培养基,玉米粉:基皮:米糠:硫酸***=7:3:2: (3)诱变后培养基,玉米粉:基皮:米糠:硫酸***=8:3::2:,水80ml。(2) 原料:玉米粉、基皮等(3) 菌种分纯将就皮采集菌种取出一部分,置入装有10mL生理盐水和若干玻璃珠的小三角瓶内,振荡15分钟,将上清液一次稀释成10-1、10-2、10一3,,29C培养5~6天,分别挑取单个菌落接入斜面,29C培养一周。以大连某厂的生产用菌B-11为对照,对分离菌株做摇床发酵试验,96h后测定糖化力,配合镜检,确定诱变的出发菌株。二、试验菌株的诱变用生理盐水洗下成熟出发株的抱子、倒入5mL麦汁种1%酵母膏的三角瓶中,,使抱子活化,后3500r/,,再用缓冲液5ML洗转入小三角瓶内(内有数枚无菌玻璃珠),振荡10分钟,使抱子分散均匀,过滤,制成单抱子悬浮液,将浓度调至106个/ml取10ml抱子悬浮液于9cm平板中,紫外线(UM照射诱变2分钟(避光操作),紫外线动率15W室温,搅拌,照射距离30cm向经紫外线处理的菌液中加入硫酸二乙酯(DES稀液(原液1ml,95%乙醇4ml配制),32C恒温处理15分钟,不断摇动平皿,处理后立即稀释至10-2、10-3(中止反应),~,29C培养5天后挑取单菌接入试管。摇床发酵试验,优选出糖化力高的新菌株 UD-7等。三、糖化酶的制备(一)材料:菌种:黑曲霉仪器:恒温培养箱离心机水浴锅恒温液体振荡培养器小型液体发酵罐分光光度计等试剂:%苯甲酸钠乳酸氢氧化钠硫酸铉等(二)设备LRH-250型生化培养箱上海一恒科技有限公司;TGL-16C型台式高速离心机上海安亭科学仪器厂;1086®精密水浴锅德国GF公司;HYG-II型迪转式恒温调速摇瓶机上海新星白动化控制设备成套厂;UV-2100型紫外分光光度计UNICO(上海)仪器公司;LS-350L型立式压力蒸气灭菌锅上海医用核子仪器厂;MP2000网电子天平精科仪器(上海)有限公司;DG-2B多功能恒温箱上海医疗器械修造厂;超净工作台苏净集团安泰公司。(三)方法液体深层发酵工艺流程:试管斜面菌种一种子扩大培养一液体深层通风发酵一过滤一离心一干燥一粗酶制剂一酶活测定配方:斜面种子培养基: