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中国医药工业杂志, · ·
大麦根磷脂酶的分离纯化
姚峻,王晓丹,姜晓雷,王凤侠,赵长新
大连工业大学生物与食品工程学院,辽宁大连
摘要:。结果显
示,,得到个洗脱峰,,—电泳检测。峰有
条蛋白条带,,酶活力回收率为.% 。用—一离子交换色谱分离,
得个洗脱峰,其中仅峰有酶活力,—电泳检测该活力峰仅条蛋白条带,相对分子质量约.,纯度
,酶活力回收率为%。
关键词:磷脂酶;分离纯化; 电泳分析
中图分类号: 文献标志码: 文章编号:.—.

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磷脂酶包括羧酸酯水解酶即磷脂酶,磷脂受损害肝细胞的再生能力。本研究考察了麦根
酰基水解酶,,...、磷脂酶溶血卵中磷脂酶的分离纯化方法, 以便进一步研究其酶学
磷脂酰基水解酶,,...、磷酸二酯水解性质及应用。
酶即磷脂酶,,...和磷脂酶, 仪器与试药
...。磷脂酶可以催化多种磷酸脂水解, . 色谱柱. ,.,江
调节人体新陈代谢,服用后可改善机体代谢,增进阴市新辉层析设备有限公司。
食欲, 改善某些疾病的症状甚至痊愈,还可以提高葡聚糖凝胶、—一羧甲基葡聚
糖凝胶大连宝生物工程;四甲基乙二胺和过
收稿日期:—;修回日期:—.
基金项目: 国家“十一五”科技支撑专项项目. 硫酸铵天津市福晨化学试剂厂;丙烯酰胺北京盖利精
细化学品有限公司;十二烷基磺酸钠,天津科密欧
作者简介:姚峻一, 男,硕士研究生,专业方向:植物酶
学。生化试剂;水为自制蒸馏水;纯净水杭州娃哈哈集团有
通信联系人:赵长新一,男,教授,从事蛋白质分析研究。限公司。
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:. 方法与结果
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. 分析方法离心,沉淀用蒸馏水溶解,
酶活力测定:参照文献。溶解液于℃用蒸馏水透析至无卜,再用聚乙
酶活力定义:大麦根酶液与底物一卵磷二醇浓缩至约/。
脂℃反应后,生成的脂肪酸用./ 样,用纯净水洗脱,流速./,分步收集洗
氢氧化钠溶液滴定至.,滴定时间,记脱液,检测合并活力峰,冷冻干燥得到磷脂
录氢氧化钠溶液的消耗量。每消耗氢氧化酶组分并测定分子量。
钠定义为一个酶活力单位。以煮沸的失..凝胶色谱纯化结果
活酶液作空白对照。在洗脱液、上样量、洗脱速度等相关参数相同
蛋白质浓度测定:于处测定样品溶液的条件下,选用.、和三种
的:。,并绘制洗脱曲线。葡聚糖凝胶,考察其对磷脂酶分离纯化的效果。磷
磷脂酶分子量测定:—凝胶电泳法。,得到个洗脱
. 磷脂酶的分离纯化峰,但有个峰发生重叠;
..凝胶色谱纯化方法离,可得个洗脱峰,峰分离完全,编号为和
大麦根用干磨机研磨,准确称量置烧,;,仅有个洗脱峰,说
杯中,加蒸馏水,℃浸提后,真空泵明酶浓缩液未得到分离。洗脱曲线见图。可见,
抽滤,所得滤液即粗酶液。取粗酶液, .葡聚糖凝胶对酶浓缩液的分离效果