猪肝中单胺氧化酶B的分离纯化.pdf

年月色谱..
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研究论文:./....
摘要:依据单胺氧化酶,的疏水特性,建立了一种从猪肝中分离纯化的新
方法。用含有% 一的膜蛋白裂解液制备粗酶,以饱和度为% ~% 的硫酸铵反抽提进行粗提,再利
用自制的配基密度为./的苯基疏水色谱及离子交换色谱进一步分离
纯化,得到纯化倍数为.、酶比活为/的。十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳—
分析显示为相对分子质量约的单一蛋白质带。采用高效液相色谱一电喷雾串联质谱对该酶进行鉴定,证实
为。本研究所用分离纯化方法可以有效纯化,为的深入研究提供技术支撑。
关键词:苯基配基;疏水色谱;阴离子交换色谱;单胺氧化酶;猪肝
中图分类号: 文献标识码: 文章编号:———
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单胺氧化酶, 能、筛选以为靶点的临床用抑制剂药物、研
是一种存在于细胞线粒体外膜的黄素蛋白究抑制剂与的相互作用动力学、寻找与
酶,主要存在于动物的肝、肾、甲状腺及脑神经细胞相互作用的调控蛋白等具有重要意义。
中,能够催化生物体内多巴胺及外源胺类的氧化脱是一种膜结合大分子,存在较多疏水
氨基反应,使体内多巴胺及外源胺维持在正常生理区,容易发生聚集,所以其分离纯化一直存在很大困
水平。研究表明帕金森症等神经退行性疾病与难,且目前没有商品化的标准供研究使用。
表达水平或活性水平的增加密切相关。等’用密度梯度离心、双水相萃取等方法
目前,以为靶点开发的抑制剂已经作为治疗从牛肝中分离纯化出。该方法操作简单,但
神经退行性疾病的药物在临床上得到广泛应用。由于在体内以多亚基形式存在,分布于较宽
因此,分离纯化得到高纯度的对研究其功的离心梯度范围,梯度离心得到的酶纯化倍数较低,
通讯联系人:,教授,主要研究方向为生物分离技术.:,—: ..
基金项目:国家自然科学基金项目..
收稿日期:——
第期孙嘉怡,等:猪肝中单胺氧化酶的分离纯化· ·
不能满足高纯度研究的需要。年, 备粗酶液。
等用离子交换色谱分离纯化猪肝,其十二.. 硫酸铵反抽提
烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳—结将裂解液置于冰水浴中,在磁力搅拌下缓缓添
果中仍存在明显的杂蛋白带,并没有实现的加研磨过的至饱和度为%,℃下静
真正分离纯化。等’“利用基因工程置,离心,弃去上清液。沉淀用
技术,得到重组表达的,并用色谱法进行了不同饱和度%,%,%,%,%,%,
分离纯化,但其结构和性质与天然具有一定%的硫酸铵溶液溶解,静置,以离心
的差别,仍然不能满足研究需要。,取上清液,透析脱盐后测定酶活,以确定蛋
本研究依据的疏水特性,选择以苯基为白沉淀中的再溶解范围。
配基的疏水柱,并对配基密度进行优化,富集.. 苯基一材料的合成及疏水
,去除大部分杂蛋白,再结合其他去除杂质及色者奈
提纯方法对其进行了分离纯化,为的深入研按文献的方法合成种不同密度的苯基
究和其他膜蛋白的分离纯化提供技术参考。一:份凝胶分别在丙酮溶液
中经.、.和.—羰基二咪唑活化,
实验部分
;将得到的约
. 仪器