实验三、鸡胚细胞的原代培养.ppt

ktchangesofserum实验三、鸡胚细胞的原代培养培养细胞生长的条件1、细胞的营养需要a、基本营养物质:氨基酸、维生素促生长因子等物质此外激素也可有助于细胞生长培养液(medium):培养基(培养液)是维持体外细胞生存和生长的溶液,分天然培养基和合成培养基。血清(FBS,FCS,CS,HS)、合成培养基,如:DMEM、RPMI1640和HamF12等2、细胞的生存环境a、温度:适宜的温度与取材的动物种类有关b、气相及pH:5%CO2;pH:-74。3、无污染及无毒:无毒是培养细胞的必须条件,细菌,病毒,支原体等二、培养细胞的生长方式1、贴附生长:必须贴附于支持物表面才能生长。见于各种实体瘤细胞2、悬浮生长:于悬浮状态下即可生长,不需要贴附于支持物表面。各种造血系统肿瘤细胞每代贴附生长细胞的生长过程潜伏期对数生长期停止期(平台期)游离期:。此时细胞质回缩,胞体呈圆球形。10分钟—4小时贴壁期:细胞附着于底物上,游离期结束。细胞株平均在10分钟—4小时贴壁。底物:胶原、玻璃、塑料、其它细胞等血清中有促使细胞贴壁的冷析球蛋白和纤粘素胶原等糖蛋白(生长基质),这些带正电荷的糖蛋白的促贴壁因子先吸附于底物上,悬浮细胞再与吸附有促贴壁因子的附着进口塑料培养瓶涂有生长基质(化学合成的功能基团)潜伏期此时细胞有生长话动,而无细胞分裂原代细胞持续约24-96h,而肿瘤细胞或无限传代细胞仅需6-24h对数生长期:细胞数随时间变化成倍增长,细胞增殖旺盛,活力最佳,最适合进行实验研究此期时间长短因细胞本身特性及接种密度、血清浓度而不完全相同,一般可持续3-5天。停止期(平台期):细胞长满瓶壁后,细胞虽有活力但不再分裂细胞数目不再增加,但仍维持一定时间的活力,此时应及时分离传代否则细胞将因中毒而发生改变甚至死亡机制:接触抑制、密度依赖性无限细胞豕(株)细胞数/毫升平顶期有限细胞系人肺0**********潜伏期平顶期