重组大肠杆菌DH5α生产rhTum-5-NGR培养条件的优化.pdf

西北大学学报自然科学版年月,第卷第期,.,,.,.·化学与化学工程·重组大肠杆菌生产一培养条件的优化魏蔚,刘萍,白斌,邓楠,申烨华,张英起。.长安大学理学院,陕西西安;.西北大学合成与天然功能分子化学教育部重点实验室/化学与材料科学学院/新药研究所,陕西西安;.第四军医大学药学系生物技术中心,陕西西安摘要:目的提高重组大肠杆菌仪生产一的能力。方法在摇瓶中研究了种子茵龄、接种量和诱导时机等因素对茵体生长及一表达量的影响。结果最佳条件为接种量%,初始为.,装液量%,./,诱导表达。在此条件下,摇瓶中的表达量占茵体总蛋白的.%,光密度为.,生产能力为.,。结论构建的工程茵发酵的稳定性和重复性良好,为肿瘤新药一的工业化生产奠定基础。关键词:重组大肠杆菌;一;培养条件中图分类号:.文献标识码:文章编号:..,,——。,,,.,,;.,,,,,;.,,,’,:...,,一.:%,.,%,..,.%,.,一.,....—。...:.;;收稿日期:.基金项目:国家自然科学基金资助项目;第四军医大学博士后基金;国家基础科学人才培养基金资助项目;年西北大学校级大学生创新性实验计划基金资助项目;陕西省教育厅产业化教育基金资助项目作者简介:魏蔚,女,陕西渭南人,从事包涵体的表达、纯化和复性研究。通讯作者:申烨华,女,陕西榆林人,西北大学教授,博士生导师,从事蛋白质纯化复性及天然产物提取分离研究。第期刘萍等:、蛋白购自北中分离得到的多肽。是由接京鼎国生物技术有限责任公司,电泳试剂均购自西近端的位氨基酸组成,是抗血安舟鼎国生物技术有限公司。管形成的功能结构域,含有个半胱氨酸,【。多培养基加%甘油。,具有特异的肿瘤新生血管导向性。一甘油管冻存之工程菌接种于装有培作为肿瘤生物学国家重点实验室,第四军医大学生养基含/的小试管中,,物技术中心的研究小组已成功构建./培养过夜。将培养好的种子液按所需接种量多肽靶向分子,,相同条件培养在肿瘤新生血管处富集,有效抑制肿瘤的生长,同时至一定的细胞浓度,./诱导表达。能减少全身用药量,降低毒副反应,提高量效/,离心收获菌体。比。,本实验在摇瓶比色法测定,以波长处的光密度锄中研究了温度、装液量、接种量和诱导时机等因素对表示。工程菌生长和一表达的影响,。发酵液菌体做—,双波长薄层扫描仪测定一表达量。./·。..仪器一型计德国,,响。实验选择,,℃和℃作为考察温立式自动电热压力蒸汽灭菌锅上海申度,重复次,结果见表。由表可知,,超净工作台苏净集团安泰公司,表达影响较大,随着温度的升高,终止恒温振荡器太仓市科教器材厂,型及一表达量均先升高后降低,℃紫外一可见分光光度计上海第三分析仪器厂,时终止达到最大值,,