石蜡切片技术.ppt

第二章石蜡切片技术1一、显微切片技术产生的原因光学显微镜发展到一定程度之后,渴望知道细胞结构由于组织太厚,光线很难穿过压片可使组织变薄,但引起变形、易位,除核外,看不到其他结构,因此需要切片变薄。因细胞水多,太软,无法切片鉴于上述情况找到一种方法使细胞水被替代,变硬,能直接切片的方法,最广泛使用的就是石蜡切片技术2二、石蜡切片技术的优点为什么选择这一技术呢?主要因为它有以下优点:便于推广、经济、适用、简便。经济,价格低,可反复使用;技术难度不大,容易掌握,但要精通也不容易;设备要求不高;可长期保存;染色容易,而且都能被染色,形成好的反差和好的选择性。3三、石蜡切片的主要过程杀生(取材)——固定——冲洗——脱水——保存——透明——石蜡透入——包埋——切片——复水——染色——脱水——封藏——观察保存(一)取材、固定、洗涤、脱水(二)透明、透蜡、包埋(三)切片、贴片(四)染色、封藏4(一)取材杀生(动物):动物必须杀生,:一般采用***(***仿)麻醉后解剖,取出所需组织。:性别合适麻醉前动物生活正常,以免影响其代谢活动,进而影响细胞结构取材部位要准,速度快5(一)::,动物(生理盐水、糜蛋白酶溶液)植物(缓冲液或水)冲洗干净,防止失水,避免压挤损伤,用生理盐水、糜蛋白酶冲去表面的血、粘液和赃物。:要准要快避免损伤(方向,刀要快,不能挤压)植物取材:用剪刀剪下材料时一定要植物生活正常,不要因缺水、营养和温度光照发生明显改变,影响细胞结构,同时发育程度、部位要准。6(二):为了使取样的细胞在形态结构和成分方面保持与生活的状态一样,就必须迅速杀死细胞避免失水变形,自溶破坏结构等。固定液的选择:快;不溶解;不收缩膨胀;软硬适中;增加折光度;增加染色能力;长期保存等7项。(1)固定剂的种类:一般采用化学固定单纯固定:只用一种试剂固定:混合固定:用两种或两种以上的试剂混合在一起进行固定如:8单纯固定:福尔马林formalin:10%的甲醛(37%——40%)醋酸(%~5%)苦味酸(饱和溶液,三硝基苯酚)~1%锇酸1~2%升***(***化***饱和水溶液约7%)9混合固定:用两种或两种以上的试剂混合在一起进行固定如:卡诺氏固定液酒精:冰醋酸(3:1)酒精:冰醋酸:***仿(6:1:3)适用于动植物一般组织细胞。FAA福尔马林(38%甲醛)5ml:冰醋酸5ml:70%酒精90ml幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精,可防止材料收缩;还可加入5ml甘油(丙三醇),也不适于细胞学研究10