实验设计方案.doc

题目:水飞蓟油脂质体制备及包封率测定选题依据:水飞蓟(SilybummarianumGaertn)又名为水飞雉、奶蓟、老鼠筋、乳蓟子等,为一年或两年生菊科草本植物[1],可分为紫花水飞蓟及其变种百花水飞蓟,是一种优良的药用植物和油料植物,被载入2010版《中国药典》。其果实用于治疗肝损伤超过2000年[2],含有大量脂肪,含油率在20%~30%左右,油味香、色泽好,和大豆油有同等营养价值,可以食用[3],被称为“袋鼠油”。果实种子榨油后油渣提取的黄***类化合物水飞蓟素及水飞蓟宾,是其果实中主要化学成分。不仅具有抗肝损伤,还具有提高免疫调节、降血脂、预防高血压等作用,不同剂型的保肝药在临床上已经使用[4]。研究现实意义和前景:水飞蓟素及其中成分水飞蓟宾具有明显的保肝护肝作用,国内外学者对水飞蓟的研究活跃,目前国内外对水飞蓟资源的利用仍然以提取水飞蓟素、水飞蓟宾为主,对果仁中油提取利用为辅[5]。但是水飞蓟油除了含有水飞蓟素和水飞蓟宾,还含有大量亚油酸、氨基酸、蛋白质、维生素E等,但不仅仅作为营养价值很高的食用油和调和油使用。近几年在医药研究发现可以用于治疗多种疾病,包括病毒性肝炎和肝硬化[6]、降低血脂、防止高血压、冠心病等。所以有必要对水飞蓟油进行开发利用,在食品和药品中开拓广泛市场。由于水飞蓟油难溶于水,口服生物利用度低。因此将水飞蓟油以脂质体为载体增加水溶性同时,借助脂质体的靶向性和缓释性,提高生物利用度。制备脂质体的方法有被动载药法中薄膜分散法[7,8]、逆相蒸发法、二次乳化法、冷冻干燥法[9]等,主动载药法中醋酸钙梯度法[10]、PH梯度法[11]、硫酸铵梯度法等[12]。鉴于薄膜分散(thin-filmdispersionmethod)方法简便,操作简单,条件温和,同时适用于油类成分,目前有多种油性药物采用薄膜分散法制备脂质体[13,14,15]。本实验制备水飞蓟油脂质体,在包封率和粒径达到要求条件下,期望能改善水飞蓟油溶解度,提高生物利用度。使得水飞蓟油在医药领域应用上前景宽阔。实验设计和实验内容:目的:以薄膜分散法制备水飞蓟油脂质体,以包封率作为主要评价指标,优化水飞蓟油脂质体的最佳处方和最优工艺。实验步骤简述:1、制备水飞蓟油溶液以紫外分光光度计进行紫外吸收波长扫描,确定最大吸收波长,配制不同溶度水飞蓟油溶度,绘制标准曲线。2、以薄膜分散法制备脂质体,高速离心,去除的游离水飞蓟油留下待用。3、脂质体经破乳再除去卵磷脂后,在最大吸收波长处测吸光度值,代入标准曲线方程,计算m包,并计算包封率%。4、用配制不同溶度水飞蓟油溶液的溶剂将游离水飞蓟油提取,测定吸光度计算m游,并计算回收率%。5、对薄膜分散制备工艺中对包封率影响因素进行单因素考察(设定制备中影响因素和水平),并正交实验对实验优化,得到最佳制备工艺。实验年限、经费、可行性考察:1)年限:约三个月2)经费:在所需仪器允许条件下,经费在计划范围内。3)可行性:实验条件允许,方法普遍使用,预实验可行。实验中关键步骤和实验评价标准、期望指标:1)实验中关键步骤:薄膜分散法制备脂质体过程中,将有机溶剂完全蒸干。考虑到水飞蓟油稳定性,真空干燥时间和温度调节适宜。脂质体破乳通过加破乳剂超声,使破乳充分得到包封率准确。4、薄膜分散法制备的脂质体是多室脂质体(multilamellarvesicles