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干扰素的工艺制备流程.ppt


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文档列表 文档介绍
基因工程药物
--干扰素的制备
1
精选课件
1 什么是干扰素
概念(interferon,IFN):机体免疫细胞产生的一类细胞因子,是机体受到病毒感染时,免疫细胞通过抗病毒应答反应而产生的一组结构类似、功能接近的生物调节蛋白。
根据分子结构和抗原性的差异分为α、β、γ、ω等4个类型。
2
精选课件

1. 根据来源、基因序列和氨基酸组成分类
◆ I 型干扰素:IFNα、IFNβ、IFN τ、IFN ω
来源:白细胞、成纤维细胞、病毒感染的组织细胞等
功能 :抗病毒感染、抗肿瘤生长 、免疫调节(较弱) 其中IFN-α为多基因产物,有23种以上的亚型。
◆ II 型干扰素:干扰素γ(IFN)
来源:活化的T细胞和NK细胞产生
功能:免疫调节
3
精选课件
提高单核巨噬细胞、树突状细胞的抗原提呈能力 增强Tc细胞和NK细胞的杀伤活性 抑制TH2细胞形成,下调体液免疫应答 趋化作用 抗病毒和抗肿瘤作用(次要) 2. 根据动物来源确定分类 人干扰素(HuIFN),小鼠干扰素(MuIFN)。
4
精选课件
不同来源的干扰素
5
精选课件
重组干扰素的临床应用
广谱抗病毒活性(rhuIFNα)
慢性乙型、丙型、丁型肝炎;疱疹、病毒性角膜炎。
直接抗肿瘤活性(rhuIFNα)
毛细胞和慢性髓样白血病、 Kaposi肉瘤、非霍奇金淋巴瘤。
免疫调节活性——治疗慢性肉芽肿瘤(rhuIFNγ)
多发性硬化症 rhuIFNβ
6
精选课件
2 基因工程大肠杆菌发酵生产工艺
7
精选课件
干扰素生产工艺路线
上市产品:重组人干扰素rhuIFN
1986,rhuIFNα-2a, rhuIFNα-2b;
1990,rhuIFNγ-1b;1993,rhuIFNβ-1b;
2001-2002: PEG化IFN,PEG-Intron, Pegasys
表达产物:无糖基化,N-met,无活性包涵体
工艺特点:发酵过程,随后变性、复性过程。
基因工程大肠杆菌发酵生产工艺:
8
精选课件
目的基因的分离
克隆载体
目的基因与克隆载体的体外重组

重组体导入大肠杆菌K12

受体菌的培养及筛选

从受体菌中获取目的基因
表达载体
重组质粒
导入大肠杆菌
受体菌的筛选,表达性、稳定性等检测
工程菌

基因工程菌的制备
9
精选课件
一、目的基因的分离与扩增
1. 破碎细胞,用Trizol法提取总的RNA
2. 将生产干扰素的人白细胞的mRNA分级分离然后进行凝胶电泳切取目的基因片段
3. 用逆转录试剂盒逆转录,把总mRNA逆转录成cDNA
4. 以cDNA为模板、干扰素引物为引物,PCR,得到完全的干扰素基因的PCR产物
“粘性末端”
10
精选课件

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  • 文件大小1.24 MB
  • 时间2020-11-11