《标准qcamqca培训》ppt参考课件.ppt

动物源食品中喹喔啉-2-羧酸和
3-***喹喔啉-2-羧酸残留检测-HPLC方法
国家兽药残留基准实验室
农业部食品安全评价重点开放实验室

吴玉杰
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目的意义
卡巴氧和喹乙醇为喹喔啉类药物，作为饲料添加剂用于育成猪，具有抗菌促生长作用。
卡巴氧在动物体内迅速脱氧转化成其它代谢产物，其中消除最慢的为喹喔啉-2-羧酸(QCA)，作为残留标示物；喹乙醇在动物体内的代谢过程和卡巴氧类似，转化为脱一氧和脱二氧化合物后，进一步代谢为3-***喹喔啉-2-羧酸(MQCA)，在动物体内残留时间最长，规定其为残留标示物。
因卡巴氧和喹乙醇的毒副作用，1998年欧盟禁止对其使用。
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标准由来
农业行业标准（农财发[2005]58号）制定和修订项目
中华人民共和国农业部公告第781号(公告－3-2006)
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试剂材料
标准品及标准溶液
甲醇、乙酸乙酯、 偏磷酸、甲酸、磷酸、磷酸氢二钾、 偏磷酸甲醇溶液、氢氧化钠溶液、甲酸甲醇溶液 、磷酸缓冲液、氢氧化钠-甲醇溶液
试剂
精确称取喹喔啉-2-羧酸和3-***喹喔啉-2-羧酸各10 mg，用甲醇配成浓度为1 mg/mL的标准贮备液，4℃避光保存，有效期6个月
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试剂配制注意事项
偏磷酸甲醇溶液：注意加热过程、浓度配比
甲酸甲醇溶液：现用现配
磷酸缓冲液：注意调节pH值
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样品前处理方法
准确称取组织5g置于具塞离心管中，加5％偏磷酸10％甲醇溶液8mL，旋涡混合2min，在4℃下6000r/min离心15min，取出上清液，然后再向组织样品中加5％偏磷酸10％甲醇溶液8mL重复提取一次，合并2次上清液。于上清液中加乙酸乙酯8mL，旋涡混合1min，4000r/min离心10min，取有机相层，再加乙酸乙酯8mL重复提取，合并2次有机相。有机相中，加磷酸盐缓冲液6mL，旋涡混和1min，放置10min，使下层清晰，收集水相。另用磷酸盐缓冲液6mL提取乙酸乙酯相一次。使水相清晰，合并2次水提取液。
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MAX柱依次用甲醇3mL、水3mL活化。加样品提取液至MAX柱中，控制流速小于3mL/min，、甲醇3mL淋洗，抽干，2％甲酸甲醇溶液3mL洗脱，洗脱液置45～50℃水浴氮气吹干，加氢氧化钠-甲醇溶液200μL溶解残渣，旋涡混匀，待测。
操作步骤
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液相色谱柱：Hypersil 25 cm× mm
检测波长：320 nm
柱温：30℃
流动相：甲醇-水（40:60，v/v），加入1%甲酸
流速： mL/min
进样量：40 μL
定量方式：外标法
样品测定
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图1 QCA标准溶液HPLC色谱图
图2A猪肌肉空白色谱图
图2B 猪肌肉添加2μg/kg 的QCA色谱图
测定样品色谱图-QCA
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图3A 猪肝脏空白色谱图 图3B 猪肝脏添加10μg/kg的QCA色谱图
图4A 鸡肌肉空白色谱图 图4B 鸡肌肉添加4μg/kg的QCA色谱图
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