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蛋白质分离纯化及鉴定ppt课件.ppt

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文档列表 文档介绍

凝胶过滤层析法
聚丙烯酰***凝胶电泳
蛋白质分离纯化及鉴定
1
凝胶过滤层析法
2
试验原理
利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。
3
凝胶层析的原理
4
Kd=(Ve-Vo)/Vi
5
优点
条件温和
操作简便
损失少回收率高
层析柱可反复使用
6
凝胶及凝胶柱的选择
根据不同分子量选择不同凝胶
Sephadex: 交联葡聚糖 G-10，15，25，50，75，100，150，200；得水值 X 10
Sepharose：琼脂糖凝胶 Bio-Gel A
Bio-Gel P：聚丙烯酰***凝胶分子筛
Sephacryl：用N，N-亚甲双丙烯酰***交联的葡聚糖凝胶
7
凝胶柱的选择
8
凝胶的前处理
溶胀：称取适量凝胶干粉，用约10倍蒸馏水浸泡24小时以上，待凝胶充分溶胀后，倾去上层悬浮物及蒸馏水。
碱洗： M NaOH 溶液浸泡半个小时，然后用蒸馏水洗至中性。
酸洗： M HCl 溶液浸泡半个小时，然后用蒸馏水洗至中性。
平衡：用起始缓冲液浸泡凝胶，直至凝胶液pH与起始缓冲液相同。
9
将层析柱垂直固定，加入适量溶剂排走空气。
将平衡好的凝胶搅匀，连续倾入柱中，待其自然沉降至1/4~1/3高时打开下端出口，让溶剂慢慢流出，继续侵入凝胶至沉降到所需高度。装柱时要注意操作压。
用3-5倍柱床体积的起始缓冲液走柱，使交换剂充分平衡，柱床稳定。
装柱
10

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