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核酸提取及常见问题分析
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第一部分：DNA提取方法简介
第二部分：DNA提取常见问题、
　　　　　原因分析及其对策
内容
第三部分：RNA提取方法简介
第四部分：RNA提取及其RT-PCR常见
问题、原因分析及其对策
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核酸是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，因此核酸的提取是分子生物学实验技术中最重要、最基本的操作 。
前言
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第一部分：DNA提取方法简介
第二部分：DNA提取常见问题、
　　　　　原因分析及其对策
第三部分：RNA提取方法简介
第四部分：RNA提取及其RT-PCR常见
问题、原因分析及其对策
第一部分：DNA提取方法简介
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DNA提取的几种方法
基因组DNA的提取
CTAB法
　SDS法
　其它
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DNA提取的几种方法
非基因组DNA的提取
质粒DNA的提取
碱裂解法
煮沸法
线粒体、叶绿体DNA的提取
差速离心结合SDS裂解法
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基因组DNA－ CTAB法
CTAB法原理（植物DNA提取经典方法）
CTAB（hexadecyltrimethylammonium bromide，十六烷基三***溴化铵），是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，并与核酸形成复合物。
该复合物在高盐溶液中（> NaCl）是可溶的，通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
注：CTAB溶液在低于15℃ 时会形成沉淀析出，因此在将其加入冰冷的
植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15℃。
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CTAB提取缓冲液的经典配方
组份
Tris-HCl （）
EDTA （）
NaCl
CTAB
β-巯基乙醇
终浓度
100 mM
20 mM

2%(W/V)
%（V/V）使用前加入
Tris-HCl （）提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏；
EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性；
NaCl 提供一个高盐环境，使DNP充分溶解，存在于液相中；
CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离；
β-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除
基因组DNA－ CTAB法
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CTAB提取缓冲液的改进配方
组份
Tris-HCl （）
EDTA （）
NaCl
CTAB
PVP40
β-巯基乙醇
终浓度
100 mM
20 mM

3%(W/V)
5%(W/V)
2%（V/V）使用前加入
PVP（聚乙烯吡咯烷***）是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同时它也能和多糖结合，有效去除多糖。
基因组DNA－ CTAB法
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CTAB法流程图
植物材料
裂解液
上层溶液
液氮研磨
抽提
细胞裂解
干燥溶解
离心洗涤
酒精沉淀
DNA溶液
基因组DNA－ CTAB法
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