复发性外阴阴道假丝酵母菌病菌种的分析.pdf

南方医科大学级硕士学位论文复发性外阴阴道假丝酵母菌病菌种分析学位申请人导教师答辩委员会主席答辩委员会成员妇产科宗利丽副教授王沂峰教授罗新教全松教授张晓薇教授谢梅青教授论文评阅人李洁教授李志刚副教授彭冬先副教授专名称指王彩丽授月广州课题来源:国家高技术研究发展计划业●■●
㈣㈣㈣㈣复发性外阴阴道假丝酵母茵病菌种分析硕士研究生:王彩丽指导教师:宗利丽副教授摘要研究背景外阴阴道假丝酵母菌病琕浅<耐庖跻道感染性疾病,サ男曰钤酒谂栽谝簧兄辽倬淮蜼,其中ヒ%的患者发展为复发性外阴阴道假丝酵母菌病匆荒昴赩发作位蛞陨显虺芌S捎谒锤锤捶⒂经久不愈,严重干扰了妇女的身心健康。一般为与发生有关的因素有:①亚临床酵母菌的存在;②致病菌毒力的增强;③肠源性感染;④性传播;⑤宿主防御机能的减弱。不仅给患者生活造成影响,更重要的是,随着抗真菌药物的广泛和反复应用,使嚼丛侥阎巍S捎谥虏〖偎拷湍妇掷嗟脑黾雍凸饣偎拷湍妇,甮、克柔假丝酵母菌戎侄粤俅渤S每辜偎拷湍妇腥疽┪锊幻舾谢蚓哂刑烊豢剐裕丝酵母菌感染的诊断和治疗带来了新的课题,因此致病假丝酵母菌菌株的鉴定对明确感染和传染源以协助诊断及治疗具有重要意义。外阴阴道假丝酵母菌病的主要致病茵为白假丝酵母菌產。白假丝酵母菌致病具有多变性,可在许多解剖部位与宿主共栖生存,且每一种生存状态下都有其适应环境的特异系统。这意味着白假丝酵母菌及其它假丝酵母菌属的疾病谱超过了大多数其它共栖微生物。有研究发现,硕士学位论文,,
患者感染的假丝酵母菌的基因型没有变化,即总是感染同一克隆来源的菌株,且连续畏⒆髌诩浯硬煌慕馄什课环掷氤龅陌准偎拷湍妇辛松锓型和基因分型,结果提示大多数为内源性感染。患者分离株和其男性伴侣的外阴分离株相同或高度相关,说明阴道内优势菌株不仅能造成自身反复感染,而且可以传染给性伴。但也有研究发现针对肠道感染及性伴侣感染治疗并不能减少的复发。因此有必要对不同部位白假丝酵母菌进一步研究,以了解其致病基因型是否相同。传统的酵母菌分类主要依靠细胞形态学及一些生理生化特征,如发酵作用,同化作用及其他的生化试验,如虰系统等。上述鉴定工具依靠生理生化反应等表型特征,有时难以保证鉴定的精确性。分子生物学技术的发展使分类学者可以从遗传物质醒罢乙谰荩<偎拷湍妇姆掷嘌а芯刻供了更有效的手段。罨槌蒁駾—同源性或相关性、/序列分析、脉冲电泳核型分析、随机扩增多态蔚确肿由镅方法在假丝酵母菌分类学研究中婀惴旱挠τ茫艽蟪潭壬贤晟屏宋颐嵌约丝酵母菌属的认识。其中核糖体蚝颂翘錎的序列分析在假丝酵母菌及酵母菌的系统分类学研究中发挥着越来越重要的作用。假丝酵母菌的基因为串状重复序列,约个拷贝,包括编码、和的基因,其问的间隔区为内转录间隔区,,包括及两部分,由于进化较快,具有一定的种问特异性和种内保守性,是进行种间分类的好素材,但昂贵的测序费用限制了其应用。单链构象多态性,术的出现使这一检测技术得到广泛的应用,是基因突变分析中最常用的方法之一。其理论基础是单链哂行蛄刑匾煨缘亩痘蛉豆瓜螅个或多个碱基的变异能影响其构象,在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中,构象的改变表现为单链ㄒ坡实母谋洹R虼耍阉碊片段在加热或变性剂的作用下生成单链,在非变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳,根据各样品的单链迁移率,就可以把中文摘要
研究目的材料和方法突变体和非突变体区分开,从而达到分离菌株的目的。白假丝酵母菌分型方法众多,其中微卫星序列多态性分析方法是一种基于┰龅腄指纹图谱分析方法。微卫星即术端短片段重复序列琒蚨唐沃馗葱蛄琒侵敢陨数几个核苷酸嗍—为单位多次串联重复的蛄小N⑽佬枪押塑账的重复次数在同一物种的不同菌株间存在很大差异,因此微卫星标记可用于菌株分子分型的研究。其中白假丝酵母菌四号染色体的非编码区的微卫星序歹有高度多态性,通过对其进行基因扫描,可以达到姆直媛剩瞧裎V单位点分析所能达到的最大的分辨率。而且泻芨叩闹痔匾煨院椭馗葱裕在白假丝酵母菌的基因型分析中有良好的应用前景。本研究通过了解患者阴道、肛门、口腔及其性伴侣龟头分泌物假丝酵母菌菌种分布,找出患者不同部位及性伴侣感染菌种的相关性,并进一步分析主要致病菌白假丝酵母菌的基因型,了解与白假丝酵母菌基因型是否存在联系。月至月珠江医院妇产科门诊确诊为患者例,年龄一岁,平均年龄辏胙〔±尢悄虿⒊て谟每股丶懊庖咭种萍琳摺参照年中华妇产科学分会感染性疾病协作组关于外阴、阴道假丝酵母菌病诊治规范中评分标准对临床症状的严重程度进行评分。瓯静杉河梦蘧耷┤换颊咭醯婪置谖铩⒏孛欧置谖铩⒖腔分泌物及相应的位患者性伴侣龟头分泌物,将阴道分泌物涂%芤盒滴镜检,高倍镜镜检可见菌丝或孢子。将新鲜标本直接接种于加有氯霉素的培养基,℃培养—时后取出观察,见乳酪样菌落生长,挑选单菌落划线硕士学位论文.
研究结果培养于嘌次反复分离纯化后,再挑选单菌落接种于麦芽汁培养基进行