PCR在HIV感染研究中的应用.docx

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PCR在HIV感染研究中的应用
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简介HIV与PCR技术
•主体内容
一、 HIV的基因结构
二、 PCR在鉴定HIV感染中的童义
三、 HIV感染的定量PCR研究
四、 PCR的相关问题
五、 实例
•结语
•前言
八I•年代以来山人类免疫缺陷病毒HIV (Human Immunodeficiency Virus)感染而引起的艾滋
病(AIDS) I大1其严亜的危害性而受到人们高度巫视。
HIV
图二：HIV
力争N期诊断和寻求仃效治疗是防止其广泛传播的关键所在。
聚合酶链式反丿''、,(polymerase chain reaction, PGR)
1985年，Mallis等根据核酸H然扩增理论，建立了一种人工体外DNA扩增技术，即聚合酶链 式反应，并于1987年完成了自动化操作，极大地推动了分子生物学的发展，也为包括病再感染 在内的临床疾病诊断提供了一种崭新的于-段。
1、PCR的基本原理
靶DNA分子变性后解链，两条单链DNA分别经复性与两条引物互补结合,在4种dNTP存 在和合适的条件下，山DNA聚合酶催化引物山5' — >3'扩增延长，每经过变性、复性、延伸一 个循环，模板DNA增加1倍，新合成的DNA链乂可作为下一个循环的模板，经过30〜50个循 环，可使原DNA量增加106-109倍。
2、 主要步骤
PCR的每一循环包括变性、复性、延伸3个步骤，此外整个试验应包括DNA模板提取，如 果模板为RNA,还需增加从RNA到DNA的逆转录过程。除模板提取外，这些操作均可在同一 系统中完成，仅仅改变反应温度即可完成。
3、 引物的设计
4、 常用的PCR技术（定量PCR等）
5、 PCR产物的分析（凝胶电泳等方法）
PCR具冇敏感、特异和快速的特点，是检测艾滋病病毒、评价病情进展和探讨发病机理的有 效工具。
本文将就日前HIV与PCR研究的现状，谈谈PCR技术在HIV研究中的应用。
一、HIV的基因结构
HIV的基因结构与其它逆转录病毒基本相同，为RNA双分（，其单链RNA分了山9749个核 廿酸组成，有3组共9个基因。
第一纽为逆转录病毒共同的基因：gag、pol、envffi因，及侧現的长末端亜复顺序（LTR） 等。：tat、rev、nef。第三组为特冇基因：vif、vpu、vpr
LTP
LTR GAG
LTP
Core proteins Viral cnzyme?i
I nvclopc protein%
ENV
HIV Yr I-分高的遗传变异率，是一个多态性病痔。高度变异区在envffiw内，相当于gp120
的五个区段，gag和pol基因较少变异。目前已知HIV彳j两个型：HIV,和HIV-2O
因此,只有选择病毒基因组中高度保守区域作为目的基因加以扩增,才能有效地检测所有HIV 的变异性。
二、PCR在鉴定HIV感染中的意义
HIV常可引起潜伏感染，但仍具冇传染性，整介的病零基因组在侮个细胞中仅以很低的DNA
拷贝数存在，因此，需要建立一个敏感而乂特