2021年体外细胞培养的基本要求.ppt

第一节
体外培养的生存条件
体外细胞培养的基本要求
2020/12/6
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一、严格的无污染(无菌无毒)环境
无化学物质污染
无微生物污染
无对细胞产生损伤作用的生物活性物质污染(抗体、补体等)
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二、合适的生存环境
恒定适宜的温度
细胞培养的的最佳温度主要取决于细胞供体的体温，此外也受解剖部位体温差异的影响，如皮肤温度低于骨骼肌的温度。
● 大多数人和哺乳动物细胞系适合温度是35℃～37℃；鸟类和禽类细胞温度要求较高，℃， 37℃ 时生长缓慢；昆虫细胞的最佳生长温度为27℃；冷血动物的细胞系可耐受的温度范围较广(15℃～26℃)。
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●细胞对低温的耐受比高温的耐受强，与温度过低相比，细胞培养时温度过高是更为严重的问题，因此通常将培养箱的温度设定为略低于最佳温度。
●培养细胞置4℃下数小时后，恢复到37℃细胞仍能良好生长。
●低温冷冻技术可长期保存细胞。
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气相环境
细胞生存所需的气体主要有O2和 CO2
● 多数细胞缺O2不能生存，但高氧环境对细胞毒性作用较大。
●由于培养基的pH值取决于溶解态CO2和碳酸氢盐HCO3-间的精密平衡，因此培养环境中二氧化碳含量的变化会改变培养基的pH值。
CO2主要维持培养液的pH，细胞代谢产生的CO2，释放至培养液使培养液变酸。为维持培养液pH值的恒定，常在培养用液中加入NaHCO3。
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● pH ，而且不同细胞系间差异极小。有些转化细胞系在轻度偏酸性的环境(～)中生长较好，而有些正常的成纤维细胞系更适合轻度偏碱性的环境(～)。。总体而言细胞耐酸比耐碱强，在偏酸性环境中更有利于生长。
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液相环境(渗透压)：
指各种平衡盐溶或培养液的等渗状态，细胞必须生活在等渗的环境中，不同细胞的理想渗透压不同。人血浆渗透压约290mOsm/kg，可视为培养人体的理想渗透压。对大多数哺乳类动物细胞，渗透压在260～320mOsm/kg的范围均适宜。
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三、合适的营养条件
营养成分：与体内基本相同，主要包括：
1. 氨基酸 所有细胞都需要以下12种必需氨基酸：精氨酸、胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、组氨酸、酪氨酸和缬氨酸，这些氨基酸均为Ｌ型。
此外，所有细胞都需要谷氨酰***，谷氨酰***在细胞代谢过程中具有重要作用，所含的氮是核酸中嘌呤和嘧啶合成的来源，也是合成磷酸腺苷所需的基本物质。
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2. 单糖 主要为6碳糖，是细胞代谢的能量来源，也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原料，细胞对各种糖的吸收能力不同，葡萄糖最高，半乳糖最低。
3. 无机离子与微量元素：基本元素和微量元素，非培养液固定成分，实验研究中，通常加入不同微量元素，观察对培养细胞的影响。
4. 维生素：在细胞代谢过程中主要扮演辅酶、辅基的作用，必不可少。
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● 促生长因子及激素：主要来源于血清，对于维持细胞功能、保持细胞状态十分重要。各种生长因子的作用明显并具有特异性，激素类物质也具有促进细胞生长增殖的作用。
● 促细胞贴附物质：体外贴附型细胞在生长过程中，多需要促细胞贴附物质，不同种类的促细胞贴附物质具有不同的促细胞贴附特性。
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