综合质谱法对生物活性多肽解析表征研究.pdf

综合质谱法对生物活性多肽解析表征的研究学科专业:化学工程研究生:贾辰熙指导教师:何志敏教授副教授天津大学化工学院二零零九年六月
⋯一龋页磊眨槲期:川占等⋯·飞、多夯卜签字日期:年独创性声明学位论文版权使用授权书或撰写过的研究成果,也不包含为获得丞鲞盘堂或其他教育机构的学位或证本学位论文作者完全了解墨鲞盘堂有关保留、使用学位论文的规定。特授权墨壅盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检签字日期:年拢■一本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究成果,除了文中特别加以标注和致谢之处外,论文中不包含其他人已经发表书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。索,并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘。C艿难宦畚脑诮饷芎笫视帽臼谌ㄋ得学位论文作者签名:导师签名:’叫·:’“●А‘’’
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中文摘要现代质谱技术具备高灵敏度、高精确度、高通量、高度自动化等诸多优势,活性多肽样品:抗癌海洋环肽诙、环肽线性前体谌、二硫键神经肽谒恼、大型神经肽谖逭、合成消旋肽诹、酶解肽谄哒质谱学密切相关的多肽质谱碎裂机理,同时在各章中穿插介绍了环肽的合成、交综合质谱法有效地整合、运用多种样品前处理、样品分离等手段,质谱电离具,气相离子化学、酶学、驶А成像学等学科;并将这些本研究所建立的方法学与理论体系以及具体研究内容与结论如下:猭狭崖肪叮恳患禡蒪离子的伺鲎驳粢桓霭被岵谢玫套胱有蛄行畔ⅲ纱瞬獾没冯男蛄校焕冒刖榱孔踊Ъ扑懔硕狭延胫嘏的路径和机理,并尝试提出过渡结构假设;研究了环肽醒≡裥钥;返南提出胱踊坊榱崖肪叮⑸杓贫嘞钍笛榧右匝橹ぃ牧碞端乙酰化、到由闹首踊冯牡乃榱涯J接隻离子环化产物的碎裂模式一致,有力此环化路径的规律性,并提炼出反应开环过程规律性的“虯/вΑ保此外,观察到屠胱佣Jе胁坎谢南窒螅岢鯽离子环化碎裂路径;此子环肽中间体为固定电荷结构,故不可以被“в影响,导致易于在肽键建立还原基质法对含二硫键多肽进行扫描,结合表达序列数据库对肽序列预测,在蓝蟹围心器提取液中发现并解析了新颖的咽侧体抑制素在蛋白质组学、神经化学、生理学、核酸化学、细胞信号转导等生命科学领域得到了广泛应用。本文采用综合质谱法及其相关技术,对六类具有复杂结构的生物进行解析研究,旨在开发基于综合质谱法的新颖肽谱分析方法学,并深入研究与联酶聚体的制备、反相色谱保留机理、神经肽生理学测试等辅助性研究工作。源、离子分离器、质量分析器等技术,数据分析、肽测序软件、数据库搜索等工相关技术、手段、工具、理论应用于复杂多肽样品的表征及其生理学活性的研究。第一,采用多级质谱法对具有抗癌活性的海洋环肽进行序列测定,依据象,提出盏伎;返乃榱崖肪丁第二,针对多级质谱测序中观察到的胱佣Jе胁堪被岵谢南窒螅多级⑸杓浦嘏舃离子、调节罨奔洹碎裂合成环肽;观察证明了所提出的胱踊冯闹屑涮逡约盎坊肪都偕璧某闪ⅲ怀⑹陨杓剖笛樘剿甔而不是甈开环。第三,;电生理学实验结果证明此咽侧体抑制素肽都可以阶段性地抑制蓝蟹,一■~
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关键词:胃神经节的幽门节律;应用肽浓度为。,当起始幽门节律大于时,两肽均第四,建立多面质谱法对蓝蟹神经组织中易咫慕斜碚饔虢馕觯淮中易咫暮拖喙卮笮碗慕蟹植挤治觯=窈笊硌Щ钚匝芯康於朔椒第五,针对弱疏水性合成七肽,提出“早期吸附”过程,以此优化色谱条件担悦縚消旋产物进行在线多肽测序;利用质谱、色谱相结合的方法对固相合成关键性问题进行研究,包括水杨醛法测定树脂取代率,合理搭配缩合体系提升酯化缩合效率至%,合理选择氨基酸侧链保护剂,减少合成的预活化时间建立板上酶解法用于酶解肽谱的解析,考察了抗自水解性能、高温酶解稳定性以及颗粒对缋氲挠跋斐潭龋皇褂种蛋白样品测时,两个亩杂拿沤诼傻挠跋旌苄。坏ǖ逼鹗加拿沤诼尚∮。、.、和—⒚附夂蠹兹┩凰乇昙法对中的易咫暮拖喙卮笮碗慕卸糠治觯⒔⒅势壮上穹ǘ訮学基础。得到龇逍瘟己玫纳追澹恢势追治霰砻鳎谱峰具有相同的痾为种右员苊饬讼第六,基于胰蛋白酶技术的制备工艺、性质及结构形貌的系统研究,%的平均序列覆盖率,个平均酶解肽段数目;与传统的小时酶解相比,该法显著提高了分析通量,减少了样品消耗量轮质谱法;生物活性多肽;神经肽;蛋白组学;■
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