实验二 小白鼠骨髓染色体制片技术.ppt

实验
小白鼠骨谶染色体制片技
湖州师范学院生命科学学院生物系
、实验目的
C、了解动物细胞染色体制片的原理
自、学****骨髓细胞染色体的制片方法;
目、观察动物细胞染色体的数目和形态;
实验原理:
染色体是基因的载体。真核细胞染色体的数目
和结构是重要的遗传指标之一。制备染色体标
本是细胞遗传学最基本的技术,优良的染色体
制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交
等的先决条件。
1染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分
裂的组织和细胞悬浮液中得到。最常用的途径
是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞
中制备染色体
小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是
骨髓组织。
骨髓细胞中,有丝分裂指数相当高,因此可以
直接得到中期细胞而不必象淋巴细胞或其它组
织那样要经过体外培养。
对大型动物通常采用对骼骨、脊或胸骨穿刺术
吸取红骨髓,小型动物多采用剥离术取股骨以
获得骨髓细胞。
、实验材料:
小白鼠(■回匐口
四、实验仪器设备:
离心机、显微镜、剪刀、解剖刀、注射器及针
头、刻度离心管、吸管、载玻片和盖玻片
%秋水仙素,2%柠檬酸钠溶液,甲醇,
冰醋酸,,1/15mo1/L磷酸缓
冲液(pH=, Giemsa原液)
D五、实验步骤
C、前处理:为提高有丝分裂的指数,增多细胞中期分裂相e
提前小时向小鼠腹腔内注射口□旬秋水仙碱
溶液
(每②口y体重注入口cO●)
自、取股骨:带手套,颈椎脱臼法处死小鼠,剖出股骨,剔净
股骨上的肌肉,用自%柠檬酸钠溶液洗净,
囯、取骨髓细胞:剪去股骨两端,用注射器吸取鷗%柠檬酸钠
溶液②○●,将针头插入骨髓腔,慢慢注射,将骨髓细
胞冲
入离心管(骨髓细胞液)中,反复吹洗直至骨腔变白。
用注射器反复推拉骨髓细胞悬液几次,即可得单细胞悬
旬、离心:骨髓细胞液②口。。口sO兴■离心@□O兴
图、低渗:弃上清,加口哑□图口s⑧心●图~
O●吸管打匀,
囗恒温箱静置圖图○郑■。
、离心:②口O知■离心口O兴■。
固定:弃上清,沿管壁加團~○●固定液會甲醇:冰醋
酸
国:②①,吹散打匀,圓齣静置■口兴■。用吸管
对细胞悬液
再次吹打均匀,继续圓静置圓口○兴■
离心:口。包口O■离心口○兴■。
10、滴片:取冰箱中预冷的洁净载玻片,30°倾斜,用吸管
吸取一滴上述细胞悬液,于載玻片上适当高度滴在载玻
片上,立即吹散吹匀细胞,扩散平铺于玻片上,空气中
自然干燥。
11、染色、水洗:載玻片充分千燥后,
按1份 Giemsa&原液、9份磷酸缓冲液混匀后染色。材料面
向上,用染液覆盖载玻片,染色10-15min,用流水反面
冲洗,洗去多余染液,再用吸水纸吸干多余水分。
12、镜检:千燥后即可镜检
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用右手抓住小鼠尾巴,以左手拇指及食指抓其颈背部
皮肤,使小鼠仰卧于无名指和中指间,再以小指与无
名指夹住小鼠尾巴

颈椎脱白法处死小鼠