组织石蜡包埋和切片技术.docx

组织石蜡包埋和切片技术.docx组织石蜡包埋和切片技术
包埋剂 embedding agent
在制作切片或超薄切片时，山于组织是柔软的，或局部的软皱不均，这样制作厚薄均匀的切片是困难 的。所以有必耍用一定物质浸透组织内部，整个组织一样彼化，以利于切成薄片，这种物质叫做包埋剂。 一股用光学显微镜观察的切片，用石蜡、火棉胶、炭蜡、明胶等作包埋剂：电子显微镜则用环氧树脂、聚 苯乙烯树脂、异丁烯树脂及水溶性树脂。
石蜡制片法是将材料经固定、脱水、透明、浸蜡后包埋在石蜡里面进行切片的方法。此法适用范用，制片 手段完备，能将材料切成极薄的片子（可切至2-8微米左右），并能制成连续的片子，这是其它制片法难 以达到的，因此在光学显微镜的制片技术上它是最常用的一种方法。除了一些经不住石蜡切片法屮所应用 的各种药剂处理的材料不能应用彳I蜡切片以外，一般的材料都可以用此法制片，但有制作时间较长，操作 过程复杂以及材料易发硬或发脆等缺点。该法多采用旋转式切片机进行切片。
石蜡制片操作程序如下：
（一） 材料的采集与分割
采集材料应根据制片的H的和要求而定，材料要有代表性，无病虫害或其它损伤，如要观察病理解剖，则 要取病斑、病症部位。采下的材料应立即放在标本箱或湿布包起來带冋实验室进行分割固定（如有条件也 可在试验地采集后进行分割尚定）。为使尚定液能迅速的渗透材料，材料要进行分割。分割时动作要迅速, 以防材料萎蔦。分割块的大小,宜小不宜大,一般不超过lcm3,分割后立即杀死固定。
（二） 杀死与固定
利用药剂迅速把细胞杀死，以保持材料本来的状态和结构。
常用的固定有F. A. A |S1定液、卡诺固定液等。将同定液放在具塞小瓶中,投入材料，盖好瓶盖。用F. A. A 固定液固定，时间至少24小时。，也是保存剂,因此材料可长期保存在固 定液屮备用。卡诺固定液穿透力强，固定较小材料一般「6小时即可,最多不超过24小时。因卡诺固定液 不能做保存剂,所以固定后要用95%. 85%酒精浸洗，每级约20min.,然后保存在70%的酒巒屮备用。
（三） 脱水
脱水的H的是除去组织中的水分，便于透明、浸蜡、包埋等步骤的进行，因为这些程序中所用的药品都不 能与水混合，所以必须脱水。常用的脱水剂为酒粘。脱水过程应缓慢进行，不能操之过急或时间过长，以 免纽织变硬变脆或发生收缩现象。脱水采用等级脱水（系列脱水），即从较低浓度酒精开始，逐渐替换到 高浓度酒精。般为：50%->70%-80%-95% （此时可加少许帝红，使组织着色便于包埋时定位）一无水酒 ffi （两次），每级停留时间2~4小时或更长（无水酒精中时间宜短）。
用95%酒梢配制各浓度酒精的方法：设原右酒精浓度为A,所盂配制酒精浓度为B,则取師1原右酒耕，加 ± A-Bml蒸谓水，即可获得Ami的B%的究竟。例如:95%酒精配成70%的酒箱,则取70ml的95%酒精,加 上25ml蒸饰水，则配成了 95ml的70%的酒精。
（四） 透明
透明的H的是将脱水剂从材料屮除去，使材料透明，增记折光系数：同时便于下步的浸蜡和包埋等程序（因 为究竟不能溶解石蜡）。透明剂是一种既能与脱水剂混合，又能与包埋剂混合的药剂。常用的透明剂为二 甲苯和***仿，适用原则也是逐级进行，可减少材料收缩。一般步骤是：2/3纯酒耕+1/3二甲苯