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共轭亚油酸对c2c12细胞生脂和生肌分化影响.doc


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共轭亚油酸对c2c12细胞生脂和生肌分化影响.doc
文档介绍:
共轭亚油酸对c2c12细胞生脂和生肌分化的影响
1 共轭亚油酸对C2C12细胞生脂和生肌分化的影响
# # 2 齐仁立王 琪 王 敬 杨飞云 刘作华 黄金秀* 3 (1.重庆市畜牧科学院,荣昌 402460;2.农业部养猪科学重点实验室,荣昌 402460;3.养4 猪科学重庆市市级重点试验室,荣昌 402460)
5
6 摘 要:本研究主要分析了共轭亚油酸(conjugated linoleic acid,CLA)对C2C12细胞生脂7 分化和生肌分化的不同影响。分别培养并诱导C2C12细胞生脂转分化和正常的生肌分化,8 同时分别使用c9,t11-CLA和t10,c12-CLA两种 CLA异构体处理细胞,观察其对细胞不同分9 化的影响。结果表明c9,t11-CLA显著促进C2C12细胞的生脂转分化,而t10,c12-CLA则发
挥明显的抑制作用。此外,t10,c12-CLA抑制了C210 C12细胞的正常生肌分化,而c9,t11-CLA11 则在一定程度上具有促进作用。这些结果表明CLA对于肌肉的生长和发育以及物质代谢具12 有重要调节作用。
关键词:共轭亚油酸;C2C12细胞;生脂;生肌;分化 13
14 中图分类号: 文献标识码: 文章编号: 15
16 由于是来自共同的多能间充质干细胞,生肌细胞在特定条件下可以转分化为脂肪细胞或
[1-3]脂肪细胞样细胞(adipocytes-like cell)17 。生脂转分化的肌细胞会失去生肌能力并获得脂18 肪细胞的特性,细胞内大量产生和沉积脂肪,表达脂肪细胞特异性基因及其编码蛋白。 19 共轭亚油酸(conjugated linoleic acid,CLA)是一类含有共轭双键的亚油酸异构体,在

[4-6]20 人和动物上具有复杂的生理作用,包括促生长,抗肿瘤,抗氧化和抗肥胖等。共轭亚油21 酸的抗肥胖作用可能包括以下几方面: 抑制脂肪细胞分化、减少细胞内脂肪生成和沉积、诱
[7]22 导脂肪细胞凋亡等。C9,t11-CLA和t10,c12-CLA是两种主要的CLA异构体,通常情况下23 两者的生理作用有很大差异。在脂肪细胞上,t10,c12-CLA的抗脂肪生成作用较为强烈,而
[8, 9]24 c9,t11-CLA的作用则较弱。还有报道认为c9,t11-CLA能够改善脂肪细胞对胰岛素的敏感
[10, 11]性以及增加动物肌内脂肪的生成和沉积25 。此外,CLA对于动物肌肉的生长和发育也有
[12]26 一定影响。肌细胞的生脂转分化是与正常的脂肪细胞生脂分化或肌细胞生肌分化不同的
收稿日期:
基金项目:国家“973”计划项目(2012CB124702);国家自然科学基金(31302055);重庆
市畜牧科学院基本科研业务费(14441)
作者简介:齐仁立(1982-),男,河南南阳人,博士,助理研究员,从事动物脂肪代谢相

关研究。E-mail:
# 并列第一作者
*通讯作者:黄金秀,博士,研究员,从事动物营养原理研究。Email:
27 分子事件,目前关于CLA对肌细胞生脂转分化的影响还不清楚。
28 本研究培养C2C12肌细胞系并分别诱导其生脂和生肌分化,在此基础上分别使用29 c9,t11-CLA和t10,c12-CLA处理细胞,研究CLA对肌细胞生脂转分化以及正常生肌分化的
影响。相关研究结果将会有助于我们更好的理解动物肌肉与脂肪之间30 转化的机理。 31 方法与材料 1
32 1.1 试验材料
33 C2C12鼠源肌细胞系购自于中科院上海细胞库;DMEM培养基,DMEM-F12培养基, 34 胎牛血清和马血清购自于Life公司;c9,t11-CLA,t10,c12-CLA,油红O染料和吉姆萨染料
均购自于Sigma-aldrich公司;RNAiso Plus RNA提取试剂盒、cDNA合成试剂盒和SYBR 35
36 Premix Ex Taq? II荧光定量PCR试剂盒均购自TaKaRa公司;免疫荧光染色和免疫印迹杂37 交试验用AP2(FABP4)、FAS和GAPDH的一抗和二抗均购自CST公司,MYOG和MYOD
抗体购自Santa cruz公司。 38
39 1.2 试验方法
40 1.2.1 细胞培养与诱导分化

41 复苏冻存的C2C12细胞,接种于DMEM-F12培养基中(含10%胎牛血清)培养。待细42 胞密度达到90%以上时传代,传代后的细胞接种于6孔板用于不同目的的诱导分化。正常43 生肌分化的细胞使用DMEM培养基(含2%马血清)培养8~10d。生脂转分化的细胞使用44 DME-F12培养基培养(含10%胎牛血清),待细胞密度达到70%时
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