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《电镜操作注意事项》PPT课件.ppt


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《电镜操作注意事项》PPT课件.ppt
文档介绍:
扫描电镜样品的制做与观察
解放军总医院骨科研究所

黄靖香
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目的
随着组织工程技术的发展兴起,如支架材料
的制作后,需观察样品中的孔径大小 ,与细
胞的相融性,生长形态变化等。用扫描电镜
观察获得清晰图像,是重要的检测手段之一。
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电子显微镜分透射和扫描电镜两种,透射电
镜(TEM)是观察样品中的内部结构:如细
胞器等;扫描电镜(SEM)可观察样品中的
表面形态结构。
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扫描电镜的优点
景深长,视野广,图像呈三维立体结构,样
品制作较透射电子显微镜简单,功能多,根
据样品性质不同,其处理方法也有所区别,
下面主要介绍组织工程支架、细胞、细胞外
基质等样品的制作技术。
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一. 样品制作处理步聚
取样→清洗→第一次固定(戊二醛)→第二
次固定(锇酸)→缓冲液中漂洗→梯度脱水
→醋酸戊酯置换→临界点干燥(改成六***
二硅***烷HMDS代替临界点干燥)→表面喷
镀→扫描电镜中观察。根椐我们的具体情况
加以改进。
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1. 材料准备、液体配制:
1)玻璃器皿需泡酸、蒸溜水清冼后灭菌备用。
2)磷酸缓冲液(PBS-0.1M PH-7.4)配制:磷
酸二氢钠2.964g , 磷酸氢二钠29.011g加三蒸水
1000ml,也可用不加酚红无菌Dhankes液代替。
3)固定液的配制:用PBS缓冲液配成2.5%戍
二醛和1%的四氧化锇。
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2. 取材准确、固定及时:尽可能保存原貌,
大小适宜(10mm2高5mm左右),对样品表面
用无菌Dhankes液清洗2次,迅速用2.5%戍二
醛4度下前固定4h以上。
3. 观察样品前两天,PBS洗20分钟/次×2次,
以下均在室温下,通风橱中进行。
4.1%四氧化锇酸后固定2h。
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缺插图 托上加图片 饿酸固定加图片 单宁酸加图片
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