高效液相色谱培训教材.doc

我国药典收载高效液相色谱法项目和数量比较表：ﻫ方法 项目 数量
19８５年版 199０年版 1９95年版 ２0００年版ﻫHPLC法　鉴别 ９ ３4 15０
检查　12　40 １６0ﻫ含量测定　7 60　11７ 3８７ﻫ鉴于HＰLC应用在药品分析中越来越多,因此每一个药品分析人员应该掌握并应用ＨPＬC。
I．概论
ﻫ一、液相色谱理论发展简况
色谱法的分离原理是：溶于流动相(ｍobilｅ phasｅ)中的各组分经过固定相时，由于与固定相（staｔｉonary ｐhase）发生作用(吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和)的大小、强弱不同,在固定相中滞留时间不同，、层析法。ﻫ色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tsｗetｔ）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的,色谱法(Ｃhromatoｇraphy)因之得名。后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。高效液相色谱法（Higｈ performａncｅ Liｑuｉｄ Chromaｔoｇrapｈy，HPLＣ）是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效,但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法（Hiｇh　Pｒessure Lｉqｕid Chrｏmatoｇraphy,ＨPＬＣ）。又因分析速度快而称为高速液相色谱法（Ｈｉgｈ Speed Ｌiｑuid Cｈromaｔography，HSLP)。也称现代液相色谱。ﻫ二、ＨPLC的特点和优点ＨＰLＣ有以下特点：
高压-—压力可达150～3０0 Ｋg/ Ｋg/cm2以上.
高速
——流速为0．１~１0。0 ml/min。ﻫ高效—-。ﻫ高灵敏度—-。ﻫＨＰLC与经典液相色谱相比有以下优点：ﻫ速度快——通常分析一个样品在1５~3０ mｉn,有些样品甚至在５ min内即可完成.
分辨率高——可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。ﻫ灵敏度高——紫外检测器可达0。01ｎg,荧光和电化学检测器可达0。1pg.
柱子可反复使用-—用一根色谱柱可分离不同的化合物。ﻫ样品量少，容易回收-—样品经过色谱柱后不被破坏,、色谱法分类ﻫ按两相的物理状态可分为:气相色谱法(ＧC)和液相色谱法（LC)。气相色谱法适用于分离挥发性化合物。GC根据固定相不同又可分为气固色谱法(GＳＣ）和气液色谱法（GLＣ），其中以GＬC应用最广。液相色谱法适用于分离低挥发性或非挥发性、热稳定性差的物质。ＬC同样可分为液固色谱法（ＬSＣ)和液液色谱法(LLC）。此外还有超临界流体色谱法（SＦC)，它以超临界流体（界于气体和液体之间的一种物相)为流动相（常用ＣO2），因其扩散系数大，能很快达到平衡，故分析时间短,特别适用于手性化合物的拆分。
按原理分为吸附色谱法（AC）、分配色谱法（DC）、离子交换色谱法（IEC）、排阻色谱法（EC，又称分子筛