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shRNA沉默livin基因对人恶性黑素瘤A375细胞周期和凋亡的影响.pdf


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遵义医学院
硕士学位论文
shRNA沉默livin基因对人恶性黑素瘤A375细胞周期和凋亡的影

姓名:王琳琳
申请学位级别:硕士
专业:病理学与病理生理学
指导教师:郑洪
20090501
聊琁蚨匀硕裥院谒亓鯝细胞周期和凋亡的影响摘要干扰片段的沉默效应呈增强趋势。魇较赴踅峁允荆鹤H竞目的:肿瘤的发生不仅与细胞的异常增殖和分化有关,也与细胞凋亡的异常有关。凋亡抑制蛋白琹且焕嗄谠葱韵赴制因子,其过度表达引起凋亡不足与肿瘤发生密切相关。因此以0械悖罢抑疗恶性肿瘤的新途径,成为当今肿瘤基因治疗的研究热点。莑家族成员之一,娶笠蚋没蛟谌撕谏亓鱿赴懈弑泶铮殖浦狹狪。特异的分布于多种肿瘤组织,与肿瘤的发生、发展、预后及耐药相关,将可能成为肿瘤治疗的潜在靶点。本实验拟构建针对人虻男「扇臨表达载体,观察对入恶性黑素瘤细胞凋亡和周期的影响,为探索恶性黑素瘤的基因治疗提供实验依据。方法:研究对象为人恶性黑素瘤细胞株。采用:蚩寺〖术构建泶镌靥濉通过培养细胞、细胞转染,利用荧光显微镜观察谙赴诘谋泶铩分别获取各组白组、脂质体组、阴性对照组、实验组⑹笛樽躌,采用荧光定量术检测转染前后的表达变化情况。ü赴H荆昧魇较赴检测细胞的凋亡情况。ト玖魇较赴跫觳庀赴芷谇榭觥=峁采用基因克隆技术成功构建籊一猻表达载体,并通过脂质体介导转染人恶性黑素瘤细胞株,在荧光显微镜下观察到绿色荧光。ü舛縋结果显示:实验组褪笛樽的细胞在转染后表达量分别下降了%和%,转染后表达量分别下降了%和%,细胞凋亡率:实验组褪笛樽ズ.%.%和.%:实验组褪笛樽±ズ.%哂诳瞻鬃.%尺,阴性对照组和脂质体转染组..%。±
单染流式细胞术结果显示:转染后瑂一梢餑疓谙赴撸琒期细胞数下降,饔貌幻飨裕H缓猯、芤鹨餑谙胞数升高,谙赴陆怠=崧郏设计出针对灿行蛄械姆⒖ㄑ鵶寡核苷酸片段。晒菇ǔ稣攵詌的泶镌靥籊—猯、籊一猻一猯和显砑少细胞中谋泶铩猯和艽俳鳤赴蛲觥均能使细胞周期出现/期阻滞,细胞增殖受到抑制,但调控细胞周期的作用时间点不同。关键词:汉谏亓觯篟干扰:细胞凋亡:
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删主要英文缩略词小干扰砒蛆牛血清白蛋白半胱天冬蛋白酶焦碳酸二乙酯二***亚砜脱氧核苷三磷酸氮烯咪***乙二******.—/
暂缈签字日期:纠年易年学位论文作者签名:互私球学位论文作者签名:互佩私签字日期:卅年多月日≯日抡遵义医学院硕士研究生遵义医学院学位论文版权使用授权书学位论文独创性声明导师签名:签字日期:月—侈。神,本人授权遵义医学院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。学位论文中除了特别加以标注和致谢的地方外,不包含其他入或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在学位论文中作了明确的说明并表示了谢意。本人完全了解遵义医学院有关保留、使用学位论文的规定,即:遵义医学院有权保留并向有关部门或机构送交学位论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。以公布学位论文的全部或部分内容,可以采用影印、缩印或其它复制手段保存学位论文,即:遵义医学院具有学位论文的数字化制品复制权,信息网络传播权和汇编权。保密的学位论文在解密后适用本授权书。遵义医学院硕貉芯可弦德畚聊琹基因对人恶性黑素瘤细胞州朗和凋亡的影响
现的一个黜家族成员,存在丁胚胎组织、V炎橹投嘀侄裥灾琢鲎橹】。其过度表达引起凋亡不足与肿瘤的发生密切相关。因此以0械阊罢矣行У膖效持续时间短,大多数患者在年内死亡。因此,寻找恶性黑素瘤更加有效的治疗刖吾细胞凋亡是主动连续的程序化反应,是受多种基因调控的,不仅维持细胞群体数量的自身稳定,胚胎发育和免疫克隆的选择,而且在肿瘤发生,清除转化细胞、细胞损伤反应、抗肿瘤药物治疗等方面均具有十分重要的作用【D壳暗难芯科毡槿衔肿瘤的发生不仅由于细胞过度增殖,同时存在细胞凋亡的减少。因此,了解细

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