芦荟原生质体融合的研究.pdf

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芦荟原生质体融合的研究删畐豅．甤諰．．痵．的鲜嫩王红霞，王文锋胑响％芦荟是百合科芦荟属的一种集观赏、药用、食质【‘，浚忠研纬闪艘还墒澜缧缘穆霰＝∪龋夜城芦荟和斑纹芦荟的叶片为试材，采用酶解法分离原生质体，以聚乙二醇盏挤掷氲玫的原生质体进行融合，以期为芦荟离体培养快速支持。牧嫌敕椒不夜城芦荟干净，并以％乙醇消毒。在超净工作台上，叶几次Ｈ〕鲆镀蘧袅笏次。将叶片放人大培养皿中，吸去水分，叶背面朝上，用无菌镊子小心撕去下表皮，或用解剖刀将叶片切成Ａ砣∫小片叶肉压片，显微镜下观察芦荟的完整细胞做山东农业科学，：孪缫窖г荷蒲Ъ际跸担幽闲孪状态及处理的时间等影响。—甒，用、美容和保健予一身的植物，具有极高的开发应用价值，素有“多备良药”、“天然美容师”和“家庭医生”等美称【摹俊Ｋ卸嘀侄匀颂逵幸娴奈而带动了我国芦荟栽培产业的发展。本试验以不繁殖和采用原生质体融合技术改良芦荟提供技术材料和斑纹芦荟叶片方法．附馊÷龅南誓垡镀米岳此逑片用％升***溶液浸泡灭菌屑湟《的薄片。取叶片约糜趌附庖校姘荡γ附—对照。摘要：以芦荟叶片为试材，采用酶解方法进行原生质体分离，并在此基础上对斑纹芦荟和不夜城芦荟进行原生质体融合。结果表明，以芦荟的叶肉细胞为试材，可成功分离出原生质体，而且活力较高，达％以上。聚乙二醇诤系慕峁苫竦貌糠秩诤咸濉Ｂ鲈侍宓某晒Ψ掷胫饕H【鲇诓牧系睦丛础⒚敢的组成，另外还受酶解液的渗透压、温度和值等影响。融合的效率主要受融合剂的浓度、原生质体的生理关键词：芦荟；原生质体；分离；融合中图分类号：．．；．文献标识号：文章编号：———猣矿，．瓵畐％．琾痮作者简介：王红霞，女．河南洛阳人，硬士，列教授，主要从事细胞遗传学研究。．甒，甌．籔籌；收稿日期：基金项目：年河南省教育厅立项项目嗪牛琗祇
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原生质体的活力畹脑淑孔茉之。取混有原生质体的上清液用滴管吸出并小心地铺于蔗糖溶液上，体。用％盒≈烈欢芏炔⒅破玻片上，加入相同体积的％的藏红溶液，静置螅晕⒕倒鄄欤⒓扑阍侍宓幕盍Α．侍宓娜诤显侍迦诤喜捎透逤⒏遬āＪ椅陆降吻妆驹质体悬液滴在置于直径遣Ｆ稀＞仓加入一滴溶液含分子量的ィ疞，二甲亚砜％再静置后，制片，显微镜下观察原生质体融合的情况，并计算其融合率。融合率诤系南赴赴苁峁敕治原生质体体系的建立使用纤维素酶、果胶酶成功降解了芦荟的细胞壁成分，然后经过滤、离心和漂浮址椒ㄏ嘟合进一步纯化，得到了较为纯净的原生质体生质体，无色的是有活性的原生质体，因为有活性的，而没有活性的原生质体细胞膜失去了选择通透性，藏红染料就可以进入【。本试验观察了鲈侍澹渲杏谢钚缘奈个，计算其研究发现，芦荟的叶肉细胞是分离原生质体较好的材料，从叶片中可以分离出大量的比较均匀一致的原生质体。由于叶肉细胞排列疏松，酶的作用很容易到达细胞壁，而且叶肉原生质体有明显的叶绿体存在，可为培养后杂种细胞的选择的年龄和生长条件十分重要，最好选用植株上充质组成，因而使用纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶能降解细胞壁成分，除去细胞壁，即可得到原生质在酶解液中渗透压的大小也会直接影响到分体渗透压很容易遭到破坏，若酶解液中的渗透压比细胞内高时，则原生质体可能失水皱缩，相反，又会吸水胀破，因此，分离原生质体时一定要加渗透压稳定剂嗖捎酶事洞来调节细胞内外渗另外，温度和值也会影响原生质体分离的质量，若值偏低时，酶的活性强，原生质