白灵菇原生质体制备条件的优化.pdf

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白灵菇原生质体制备条件的优化白灵菇是白灵侧耳瞮的商摘要：以白灵菇单核茵丝为材料，利用溶壁酶进行原生质体的制备，考察各因素对原生质体产量的影响，采用单因素试验和正交试验确定最佳条件。结果表明：原生质体产量最高的条件是取茵龄为斓囊禾寰仓门嘌囊鹚刻澹．疞甘露醇为稳渗剂，在酶解温度℃、酶浓度サ奶跫旅附。研究结果可为白灵菇原生质体融合及转基因研究提供理论依据。关键词：白灵菇；单核茵丝；原生质体；正交试验；溶壁酶：品名称【，隶属于真菌门、担子菌亚门、伞菌目、侧耳科、侧耳属，又名白灵侧耳、白阿魏蘑和翘鲍菇等。白灵菇肉质细嫩，味美可口，具有较高的食用价值，被誉为“草原上的牛肝菌”，颇受消费者青睐。白灵菇营养丰富，据科学测定，其蛋白质含量占干菇的％，含有种氨基酸、多种维生素和无机盐，具有医疗保健作用，能够调节机体生理平衡、提高免疫力∞为了更好地利用这一珍稀菌物资源，许多研究者已开展了对其优良菌株的选育工作。与常规育种相比，原生质体技术可以实现远缘杂交、扩大遗传物质的重组范围以及基因转化和定向诱变，获得有突出优良性状的新类型，产生更丰富的遗传变异，因此，成为育种过程中重要的手段。前提，如何提高原生质体的产量关系着该技术的成功应用，是笔者关注的课题之一。年以后，有关食用菌原生质体分离的报道大量增力，食用菌原生质体分离、培养和融合等研究涉及的菌类有香菇、金针菇、灵芝⒉谄げ喽谩⒀蚨蔷⒂芑颇、草菇、蘑菇等，常见食用菌菌丝体的原生质体的制备技术已经非中国蘑学通报，：朱坚，张鹏中图分类号：文献标志码：论文编号：；原生质体制备是原生质体技术育种的基础和重要福建农林大学菌物研究中心，福州；＝ㄅ┝执笱г耙昭г海Ｖ．甌【。疞．蟬．篜；籶籵基金项目：福建省科技重大专项“动植物受种培育及关键配套技术研究与示范秤镁”。第一作者简介：朱坚，男，年出生，福建福州人，硕士生导师，副教授，主要从事食用菌栽培、育种和加工的教学科研。通信地址：福建省福州市福建农林大学菌物研究中心，珽—：甤通讯作者：张鹏，男，年出生，河北大名人，在读硕士，主要从事食用菌育种研究。通信地址：福建农林大学菌物研究中心，珽—：瓹收稿日期：，修回日期：，；
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显微镜孩驪常成熟，笔者通过单因素试验和正交试验系统地研究各因素对白灵菇原生质体制备的影响，为白灵菇原生质体融合及转基因研究提供理论依据。牧嫌敕椒试验时间、地点本试验于年月在福建农林大学菌物研究中心进行。试验材料供试菌株：白灵菇单孢菌株．，由福建农林大学菌物研究中心提供。精密仪器和药品规格高压锅虾Ｈ暌搅破餍涤邢薰荆琘⒀G蚣剖濉⒊还ぷ魈站患潘罩莅蔡┛掌际跤邢薰荆．甎⒑阄滤∠上海博迅实业有限公司医疗设备厂⒌缱犹炱／⑸嘌上海一恒，取溶壁酶愣∥⑸镅芯克、甘露醇本┒生物技术有限责任公司，分析纯⑵咸烟恰⒄崽等┘呕约劣邢薰荆治龃。试验方法．嘌票赴绰砹迨配方，常规方法制备泵媸怨芘养基。按马铃薯常规方法制备成瓶装液体培养基。．壬褐票父事洞嘉壬海撼迫蒸馏水中，配成．附庖褐票赴词匝樯杓频呐ǘ纫G缶烦迫∪壁酶溶解于稳渗液中，配成酶解液，过滤除菌备用。．颗嘌笆占扔肞固体培养基常规方法接种培养．单孢菌丝，再将培养物接种于液体培养基中，℃静置培养天，收集菌丝体，用．侍寮剖占木恐糜的比例加入酶解液，置于水浴锅中℃水浴酶解，每隔竦匆淮危词匝樯计的酶解时间终止酶解，加入短寤奈壬褐票于凹玻