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ch基因工程工具酶.pptx


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文档列表 文档介绍
(Restriction Endonuclease)
限制与修饰(Restriction and modification)现象
限制:指一定类型的细菌可以通过限制酶的作用,破坏入侵的噬菌体DNA,导致噬菌体的寄主幅度受到限制。
修饰:指寄主本身的DNA,由于在合成后通过***化酶的作用得以***化,使DNA得以修饰,从而免遭自身限制性酶的破坏。
限制性核酸内切酶的概念
是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列,并由此切割DNA双链结构的核酸水解酶。
至2006年2月共发现3773种限制性内切酶,I、II、III型各有68、3692、10种,***化指导的3种,商品化的609种,II型中共有223种特异性。
① 第一个字母(大写,斜体)代表该酶的宿主菌属名(genus)
② 第二、三个字母(小写,斜体)代表宿主菌种名(species)
③ 第四个字母代表宿主菌的株或型(strain)
④ 罗马字母表示发现和分离的先后顺序
限制性核酸内切酶的命名原则
限制性核酸内切酶的命名原则:
属名 种名 株名
Haemophilus influenzae d 流感嗜血杆菌d株
HindⅡ HindⅢ
同一菌株中所含的多个不同的限制性核酸内切酶
Ⅱ 型(type Ⅱ): 限制酶一般是同源二聚体,修饰酶是单体, 93%
Ⅰ 型(type Ⅰ): 限制酶、***化酶识别 DNA 序列的 S 亚基 , 1%
Ⅲ 型(type Ⅲ):不到 1%
限制与修饰系统的种类
限制酶识别的序列
限制酶识别序列的长度及结构    限制酶识别序列的长度一般为 4-8 个碱基,最常见的为 6 个碱基
 4 个碱基识别位点:Sau3AⅠ  5 个:EcoRⅡ    NciⅠ      
6 个:EcoRⅠ      HindⅢ    7 个:BbvCⅠ     PpuMⅠ    8 个:NotⅠ     SfiⅠ
限制酶识别序列的结构
(1)限制酶识别的序列大多数为回文对称结构
(2)识别序列不是对称的
(3)可识别多种序列
酶切位点
(1)限制酶切割的位置
限制酶对 DNA 的切割位置大多数在内部
(2)位点偏爱(Site preference)     位点偏爱:对不同位置的同一个识别序列表现出不同的切割效率的现象。
(3)酶切位点在基因组中分布的不均一性
(4) 酶切位点的引入

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