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倪华生物显微技术第五章原位杂交.ppt

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文档列表 文档介绍

原位杂交组织化学
核酸分子杂交技术
固相杂交:
菌落原位杂交(colony in situ hybridization)
斑点杂交法(Dot blot)
Southern印迹杂交(Southern blot)
Northern印迹杂交( Northern blot)
组织原位杂交(Tissue in situ hybridization)
液相杂交
定义:
特定标记的已知序列的核酸作为探针与细胞或组织切片中的核酸进行杂交并对标记的探针进行检测的方法称为原位杂交。
Detection of DNA by nucleic acid hybridization
分类
核酸探针标记方法:
放射性探针:32P 3H 35S
非放射性探针:生物素、地高辛
探针的核酸性质不同:
DNA探针:单链DNA(Single stranded, ssDNA)和双链 DNA(Double stranded, dsDNA)
plementary DNA probe
plementary RNA probe
寡核苷酸探针
原理
探针标记:同位素标记和非同位素标记的探针(生物素标记和地高辛标记)
探针与靶序列根据碱基互补配对原则特异性结合
检测标记的探针:放射自显影、荧光检测和酶法检测。
优点
不需要从组织中提取核酸,对组织中含量极低的靶序列具有极高的敏感性。
能够完整的保持组织和细胞的形态,能更准确地反映组织细胞的功能状态以及功能上的相互联系。
应用
特定的核酸序列在染色体中的精确定位。
与细胞内的RNA杂交观察该基因的定位、定量表达。
用特异性的细菌或病毒的核酸作为探针对组织或细胞进行杂交,以确定有无病原体的感染。

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