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实训十五酶联免疫吸附试验(ELISA)
目的要求掌握ELISA的基本操作步骤,了解猪群猪瘟抗体监测的意义。
仪器及材料酶联检测仪、酶标板、微量加样器(配带滴头)、猪瘟病毒、酶标SPA、猪瘟阳性血清、猪瘟阴性血清、待检血清、、洗涤液(PBS-T)、BSA(牛血清白蛋白)、封闭液、稀释液、底物溶液、30%H2O2、2mol/L H2SO4溶液、邻苯二胺(OPD)。
方法与步骤
PPA-ELISA检测猪瘟抗体效价
,以微量加样器每孔加样100μl,置湿盒内37℃包被2~3h。
(PBS-T)将反应板洗涤三次,每次5min,甩干。
,置湿盒内37℃封闭3h。
。
,然后在酶标板的第1孔加100μl待检血清,以微量加样器反复吹吸几次混匀后,吸100μl加至第2孔,依次倍比稀释至第12孔,剩余的100μl弃去,置湿盒内37℃作用2h。
。
以稀释液将酶标SPA稀释至工作浓度,以微量加样器每孔加100μl,置湿盒内37℃作用2h。
。
,37℃避光显色10min。
,每孔50μl。
,检测之前,先以空白孔调零,当P/N≥。
注意:每块ELISA板均需在最后一排的后3孔设立阳性对照、阴性对照和空白对照。
附:常用试剂的配制
():Na2CO3 NaHCO3 蒸馏水 1000ml。
(.
目的要求掌握ELISA的基本操作步骤,了解猪群猪瘟抗体监测的意义。
仪器及材料酶联检测仪、酶标板、微量加样器(配带滴头)、猪瘟病毒、酶标SPA、猪瘟阳性血清、猪瘟阴性血清、待检血清、、洗涤液(PBS-T)、BSA(牛血清白蛋白)、封闭液、稀释液、底物溶液、30%H2O2、2mol/L H2SO4溶液、邻苯二胺(OPD)。
方法与步骤
PPA-ELISA检测猪瘟抗体效价
,以微量加样器每孔加样100μl,置湿盒内37℃包被2~3h。
(PBS-T)将反应板洗涤三次,每次5min,甩干。
,置湿盒内37℃封闭3h。
。
,然后在酶标板的第1孔加100μl待检血清,以微量加样器反复吹吸几次混匀后,吸100μl加至第2孔,依次倍比稀释至第12孔,剩余的100μl弃去,置湿盒内37℃作用2h。
。
以稀释液将酶标SPA稀释至工作浓度,以微量加样器每孔加100μl,置湿盒内37℃作用2h。
。
,37℃避光显色10min。
,每孔50μl。
,检测之前,先以空白孔调零,当P/N≥。
注意:每块ELISA板均需在最后一排的后3孔设立阳性对照、阴性对照和空白对照。
附:常用试剂的配制
():Na2CO3 NaHCO3 蒸馏水 1000ml。
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