生物技术制药-04.ppt

生物技术制药
第四章抗体制药
第四章抗体制药
第一节概述
第二节单克隆抗体
第三节鼠源性单克隆抗体的改造
第四节基因工程抗体和抗体工程
第五节抗体诊断试剂
第六节抗体治疗药物
第一节概述
1890年:Behring和北里柴三郎等发现了白喉抗毒素,并建立了血清疗法,开抗体制药之先河。
1937年:Tiselius等人用电泳法将血清蛋白分为白蛋白、甲种()球蛋白、乙种( )球蛋白和丙种( )球蛋白,并证明抗体活性主要存在于丙种球蛋白组分。
20世纪60年代初期:抗原决定簇,精制单价血清。
1975年:Köhler和Milstein等,单克隆抗体,其具有高度特异性、均一性,以及来源稳定可大量生产等特点。
1984年:人-鼠嵌合抗体
1984年至今:单克隆抗体的鼠源性及分子过大的问题得以解决,可仅作为与抗原特异性结合试剂。
单克隆抗体的应用
用于疾病的诊断和治疗:如利用单克隆抗体检测与某些疾病相关的抗原,辅助临床诊断,或用放射性核素标记单克隆抗体进行肿瘤显像,进行免疫鉴定。用于临床治疗,如针对T淋巴细胞共有的分化抗原CD3的单克隆抗体,用作免疫抑制剂。
单克隆抗体还可作为载体制备导向药物。但是要解决以下两个问题:(1)鼠源性单克隆抗体的免疫原性;(2)完整的抗体分子分子量过大,难以穿透实体肿瘤组织,达不到有效的治疗浓度。
单克隆抗体的应用
基因工程技术为解决这两个问题提供了可能。
已通过基因工程技术,制备出改形抗体、单链抗体、单域抗体、最小识别单位等很多类型的抗体或抗体单位。基本消除了单克隆抗体的鼠源性,相对分子质量只有完整抗体分子的1/80~1/3,而且鼠源性单克隆抗体的生物学活性如激活补体、促进吞噬功能(免疫调理)、抗体依赖细胞介导的细胞毒作用等,只保留同抗原特异性结合的活性。
第二节单克隆抗体
单克隆抗体是将抗体产生细胞与骨髓瘤细胞融合,通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而生产的。由于这种抗体是针对一个抗原决定簇的抗体,又是单一的B淋巴细胞克隆产生的,因此称为单克隆抗体。它是结构和特异性完全相同的高纯度抗体。制备的一般流程见下图。
单克隆抗体和多克隆抗体的制备
抗原
脾
B淋巴细胞
融合
融合
淋巴细胞
骨髓瘤细胞
克隆1
克隆2
克隆3
克隆4
第二节单克隆抗体
一、抗原与动物免疫
二、细胞融合与杂交瘤细胞的选择性培养
三、筛选阳性克隆与克隆化
四、杂交瘤细胞与抗体性状的鉴定
五、单克隆抗体的大量制备
六、单克隆抗体的纯化
一、抗原与动物免疫
(1)制备用于动物免疫的适当抗原。
化学合成抗原,如精制的地高辛。
多数情况下抗原物质只能得到部分纯化,甚至是极不纯的混合物,如部分纯化的干扰素。
通过克隆化选出最适当的单克隆抗体。
在制备恶性肿瘤细胞表面抗原的单克隆抗体时,情况较复杂,需用整个肿瘤细胞做为免疫原,经过筛选、克隆化,制备出仅存在于肿瘤细胞而不存在于正常细胞上的表面标志分子上的单克隆抗体。
一、抗原与动物免疫
(2)稳定的杂交瘤的获得
因免疫动物品系和骨髓瘤细胞在种系发生上距离越远,产生的杂交瘤越不稳定,故一般采用与骨髓瘤供体同一品系的动物进行免疫。目前常用的骨髓瘤细胞系多来自BALB/c小鼠和Lou大鼠,因此免疫动物也多采用相应的品系,最常用的也是BALB/c小鼠。
选择动物时应考虑到动物品系的免疫应答基因(Ir)对抗原免疫应答的影响。不同品系的小鼠与大鼠在对某类抗原的免疫应答上是不同的。书中表4-1是骨髓瘤细胞系一览表,可以参考。