电泳技术.ppt

电泳技术
杜卫
一、概述
电泳——带电颗粒在电场的作用下,向着与其电性相反的电极移动,称为电泳(electrophoresis)。
19世纪初(1808)发现了电泳现象。当时多用于胶体化学的分析。
1937年Tiselius利用U形玻管进行血清蛋白电泳,以界面折光率差别分离蛋白呈4-5高峰即界面电泳。
1948年 Wieland等发明以滤纸作为支持物,使电泳技术大为简化。
近30年来,由于采用多种新型支持物,仪器装置亦得到不断改进,因此出现了许多新型的电泳技术。
(一)电泳的分类:
显微电泳
自由界面电泳
区带电泳
1、按其支持物的物理性状不同可分为:
(1)滤纸及其它纤维电泳:如玻璃纤维膜、乙酸
纤维膜、聚胺纤维薄膜。
(2)凝胶电泳:如琼脂、聚丙烯酰胺凝胶、淀粉
凝胶电泳。
(3)粉末电泳:如纤维素粉、淀粉、玻璃粉电泳。
(4)线丝电泳:如尼龙丝、人造丝电泳。
2、按支持物的装置形式不同,区带电泳可分为:
(1)平板式电泳:支持物水平放置,是最常用的
电泳方式。
(2)垂直板式电泳:如聚丙烯酰胺凝胶可做成垂
直板式电泳。
(3)垂直柱式电泳:如聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳。
2、按pH的连续性不同,区带电泳可分为:
(1) 连续pH电泳:即整个电泳过程pH保持不变,如
常用的纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳等。
(2) 非连续pH电泳:缓冲液和电泳支持物间有不同
的pH的电泳,如聚丙烯酰胺凝胶盘状
电泳,等电聚焦电泳等。
(二)应用:
1、分离各种有机物:如蛋白质、酶、核酸等
2、分析某种物质的纯度及分子量
3、电泳技术与层析法结合可用于物质的结构分析4、免疫电泳可提高对蛋白质的鉴别能力
二、电泳原理
(一)电泳的基本原理
设一带电分子在电场所受的力为F
则: F = QX
球形分子运动是受的阻力F’为:
F’= 6πγηV
当F =F’时, QX = 6πγηV
移项: V Q
X 6πγη
=
(1)
V / X 为带电分子在单位电场强度下的运动速度。
———迁移率、电泳速度(V)
在具体实验中:V = d / t
电场强度: X = E /I
V =
X 6πγη
V Q
=
(2)
V =
V d / t dI
X E /I Et
=
=