第10章 动物基因工程.ppt

动物基因工程
(Animal ic Engineering)
第十章
主要内容
第一节目的基因的获取
第二节基因体外重组
第三节转基因
第四节基因敲除与基因诊断
第五节动物克隆技术
动物基因工程,原称遗传工程,是应用DNA重组技术,按照人们的意愿,在基因水平上改变生物遗传性,创造新生物物种,通过工程化为人类提供有用产品及服务的技术;或指应用现代化的生物科学和遗传学技术,对动物基因进行操纵或改造的科学工程。
基因工程的核心技术是DNA的重组技术,还包括基因的表达技术,基因的突变技术,基因的导入技术等。
什么是动物基因工程?
基因工程一般分为4个步骤:
一是取得符合人们要求的DNA片段,这种DNA片段被称为“目的基因”;
二是将目的基因与质粒或病毒DNA连接成重组DNA;三是把重组DNA引人某种细胞;
四是把目的基因能表达的受体细胞挑选出来。
基因工程的基本操作
第一节
目的基因获取
1 基因组DNA及总RNA的提取



动物DNA的来源(核DNA、线粒体DNA、质粒DNA)
1. 血液、毛发、皮屑(口腔上皮细胞)、精液、化石及耳朵等活体组织;
2. 固定和包埋的组织标本:脱蜡、蛋白酶K消化
RNA来源:新鲜组织或细胞
DNA提取方法:常规苯酚-氯仿方法、试剂盒方法---;
RNA提取:所用器皿和试剂必需经高温灭菌或DEPC处理
Genome DNA
Total RNA
2 基因文库
基因文库(Gene library)包括cDNA文库(cDNA library)和基因组文库(Genome library)。

文库:
cDNA是指以mRNA为模板,经反转录酶催化合成DNA,则此DNA序列与mRNA互补,称为互补DNA或cDNA。
RT-PCR:反转录PCR(Reverse Transcription PCR)
cDNA文库:提取出组织细胞的全部mRNA,在体外反转录成cDNA,与适当的载体常用噬菌体或质粒载体连接后转化受体菌,则每个细菌含有一段cDNA,并能繁殖扩增,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。
实际为不包含内含子的基因组文库。
cDNA文库
(cDNA library)
基因组文库
(Genomic DNA Library)
从生物组织细胞提取出全部DNA ,用物理方法或酶法将DNA降解成预期大小的片段,然后将这些片段与适当的载体连接,转入受体细菌或细胞,这样每一个细胞接受了含有一个基因组DNA片段与载体连接的重组DNA分子,而且可以繁殖扩增,许多细胞一起组成一个含有基因组各DNA片段克隆的集合体,就称为基因组DNA文库。如果这个文库足够大,能包含该生物基因组DNA全部的序列,就是该生物完整的基因组文库,能从这文库中钓取该生物的全部基因或DNA序列。