第5章 哺乳动物胚胎培养与胚胎移植(08-08-25).ppt

第五章 哺乳动物胚胎培养
与胚胎移植
第一节  胚胎培养
第二节  胚胎移植
第五节 胚胎干细胞
第四节 嵌合体制做
第三节  无性繁殖
本章讲授提纲
第一节  胚胎培养
早在1913年Brachet就尝试对兔囊胚进行体外培养实验,可是由于对各种动物胚胎所需的体外培养液配方不清楚,致使这方面工作在20世纪的上半世纪发展缓慢。
1957年,美国学者Whitten找到了能使小鼠早期胚胎在体外生长发育的培养液配方,从而为哺乳动物体外胚胎培养打开了一条通路。
哺乳动物胚胎培养和胚胎移植在现代医学和畜牧业的发展中占有重要地位。近 20多年来,世界上许多实验室均做了大量工作,发展迅速。
把受精卵和不同发育时期的早期胚胎取到体外进行培养,不仅是研究胚胎发育机理的重要手段,而且在培育试管婴儿和试管动物方面有着很大的应用价值。
哺乳动物胚胎对发育条件要求严格,而且各种动物胚胎所需的营养条件又有所不同,因此无法制定胚胎培养液的通用配方。
体外受精
不同时期胚胎的体外发育潜能
一定的合成培养液
一定的气相条件
从已有的实验结果来看,体外胚胎培养有下列几个关键环节:
成熟的卵子在试管内同精子相遇完成受精作用的过程,称为体外受精。
卵子的取得方法有多种,如自然排卵、激素诱发超数排卵(superovulation)、从卵巢手术取卵。
人工受精率同卵子成熟度关系极大:卵巢中越接近排卵时间的卵子,受精率越高;未成熟或过熟的卵子受精率低下。
一、体外受精
人工受精所用的精子必须是获能(capacitation)的,直接排出的精子或从附睾中取出的精子不能授精。
所谓获能即是精子在雌性生殖管道中停留期间,发生了一定的生理、生化和形态变化,从而获得了同卵子结合的能力的过程。
在体外,利用卵巢滤泡液、血清、输卵管液、子宫液和人工培养液处理,同样可使精子获能。
***酸钠、乳酸钠和BSA对小鼠精子体外受精力的影响
培养液成分
卵数
精子穿入的卵子数
(%)
基础培养液
+ 20毫克分子浓度乳酸钠
+ 1毫克分子浓度***酸钠
+ 4毫克/毫升BSA*
+ 以上三种成分
182
242
219
258
330
0
20
65
143
289
(0)
(9)
(30)
(65)
(88)
* BSA, 小牛血清白蛋白
人工培养液中的***酸钠、乳酸钠和小牛血清白蛋白(BSA)对小鼠精子的获能影响很大。
受精卵和最早期胚胎较难培养。例如,从猪输卵管中收集到的受精卵,90%能发育到2细胞期,但很少超过4细胞期,可是从子宫中收集到的6-8细胞期的胚胎,却有90%的可发育到桑棋胚或囊胚。
又如牛受精卵:6%可培养到8-12细胞期;2细胞期胚胎:则有26%可发育到8-12细胞期;8细胞期胚胎:则有51%可发育到桑椹胚。
二、不同时期胚胎的体外发育潜能