胚胎干细胞的分离培养技术.ppt

第六节第六节动物动物胚胎干细胞的分离培养技术胚胎干细胞的分离培养技术 Embryonic Stem cells Embryonic Stem cells ( ( ES cells ES cells ) ) 一、概述一、概述二、二、胚胎干细胞研究的意义胚胎干细胞研究的意义三、三、胚胎干细胞研究的历史胚胎干细胞研究的历史四、胚胎干四、胚胎干细胞分离培养的基本程序细胞分离培养的基本程序五、五、胚胎干胚胎干细胞技术目前存在的问题和发展远细胞技术目前存在的问题和发展远景景第六节第六节胚胎干细胞技术胚胎干细胞技术 Embryonic Stem cells (ES cells) Embryonic Stem cells (ES cells) 一、概述一、概述??哺乳动物胚胎干细胞( 哺乳动物胚胎干细胞( embryonic stem cells, embryonic stem cells, ES ES 细胞) 细胞) 一般是指从早期胚胎经一般是指从早期胚胎经体外分化抑体外分化抑制制培养分离出来的具有全能性的细胞。培养分离出来的具有全能性的细胞。?? ES ES 细胞是由细胞是由 Evans Evans 和和 Kauf-man1981 Kauf-man1981 年首次从年首次从延迟小鼠囊胚中分离出来的多能性细胞,当延迟小鼠囊胚中分离出来的多能性细胞,当时称之为时称之为 EK EK 细胞。以后称之为胚胎干细胞。细胞。以后称之为胚胎干细胞。人胚胎干细胞分离技术途径人胚胎干细胞分离技术途径 ICM PGCs ES ES 细胞的特点: 细胞的特点: ?? ES ES 细胞具有胚胎细胞的特性细胞具有胚胎细胞的特性,在,在形态上形态上表现为表现为体积小、核大,核仁突出,培养时呈克隆状生体积小、核大,核仁突出,培养时呈克隆状生长;在长;在功能上功能上, , ES ES 细胞具有发育的全能性,即细胞具有发育的全能性,即具有分化为成年动物体内任何一种细胞类型的具有分化为成年动物体内任何一种细胞类型的能力。能力。?? ES ES 细胞具有细胞系的特征细胞具有细胞系的特征,在饲养层上能维持,在饲养层上能维持未分化状态并实现自我更新。因为可无限增殖, 未分化状态并实现自我更新。因为可无限增殖, 也可冷冻保存。也可冷冻保存。二、二、胚胎干细胞研究的意义胚胎干细胞研究的意义?? ES ES 细胞在哺乳动物个体发生发育规律的研究细胞在哺乳动物个体发生发育规律的研究中极有价值的工具; 中极有价值的工具; ?? ES ES 细胞是研究细胞是研究细胞分化细胞分化的理想手段;图的理想手段;图?? ES ES 细胞是研究基因功能的首选细胞; 细胞是研究基因功能的首选细胞; ?? Es Es 细胞作为生产转基因动物的主要途径之细胞作为生产转基因动物的主要途径之一; 一; ?? ES ES 细胞治疗技术将引起一场医学革命; 细胞治疗技术将引起一场医学革命; ?? ES ES 细胞可用于研究细胞癌变机理和新药物的细胞可用于研究细胞癌变机理和新药物的筛选。筛选。??二、胚胎干细胞研究的历史二、胚胎干细胞研究的历史 1、 1981 年 Evans 和 Kaufman 获得小鼠 ES 细胞系 2、 1988 年 Doetschman 获得仓鼠 ES 细胞系 3、 1994 年 Wheeler 和 Robert 获得猪 ES 细胞系 4、 1998 年 Thomson 获得人的 ES 细胞系 5、 2007 年日本的 Yamanaka 研究小组和美国的 James Thomson 研究小组分别获得诱导多能性干细胞( induced pluripotent stem cell , iPS 细胞) ??四、胚胎干细胞分离培养的基本程序四、胚胎干细胞分离培养的基本程序??( (一一) )选择抑制细胞分化的培养体系选择抑制细胞分化的培养体系?? 1 1、饲养层培养体系、饲养层培养体系?? 2 2、条件培养体系、条件培养体系?? 3 3、培养液中添加分化抑制因子体系、培养液中添加分化抑制因子体系??四、胚胎干细胞分离培养的基本程序四、胚胎干细胞分离培养的基本程序??(二)早期胚胎的选择(二)早期胚胎的选择??(三)胚胎干细胞的分离(三)胚胎干细胞的分离??(四)胚胎干细胞的保持(四)胚胎干细胞的保持??(五)胚胎干细胞的鉴定(五)胚胎干细胞的鉴定??(六)胚胎干细胞的分化潜力验证(六)胚胎干细胞的分化潜力验证五、五、胚胎干胚胎干细胞技术目前存在的问题和发展远景细胞技术目前存在的问题和发展远景?? 1 1、根据细胞的分化特点建立更有效的培养体、根据细胞的分化特点建立更有效的培养体系系?? 2 2、加强胚胎干细胞体外诱导分化研究、加强胚胎干