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染色体的分带技术
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目的要求
了解染色体C带、G带制备的基本原理,掌握染色体C带、G带的染色技术。
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C带显示的实验原理
DNA分子经酸、碱、盐处理可以发生不同的变化,酸处理可以使DNA分子脱嘌呤,碱处理可以使DNA变性及溶解,2×SSC溶液处理可以使DNA骨架断裂并使片断溶解。在C带显示过程中,染色体臂的DNA被酸、碱、盐选择性地破坏了,着色较浅,而结构性异染色质区哉DNA结构紧密,从而保护了C带区的异染色质免受酸、碱、盐的破坏,使其容易着色,从而产生C带。
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实验用品
1.器材:显微镜、恒温水浴箱、载玻片、染色缸等;
2.试剂:、5%Ba(OH)2、2×SSC溶液、Giemsa染液、1/15M磷酸缓冲液等。
3.材料:小鼠染色体标本
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方法与步骤
取老化一周的染色体标本,;
DW冲洗三次后,转入50℃5%Ba(OH)2中保温10-15分钟;
自来水冲洗3-5分钟,再用DW充分分冲洗掉玻片上附着的Ba(OH)2;
将标本放到65℃2×SSC处理60分钟,DW冲洗,空气干燥;
Giemsa染色10分钟,冲洗,镜检。
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结果显示
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G带显示实验原理
由于构成染色体的DNA一级序列的差异,导致与之结合的蛋白质的状态也有所不同。如果染色体上某一区域DNA为重复序列,转录活性低,与之结合的蛋白质也较稳定,因此较利于染料的积累,从而显出暗带。相反,若某一区域的DNA富含转录活性的结构基因,包装它们的蛋白质也较松散,着色较浅,显明带。
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实验用品
1.器材:显微镜、恒温水浴箱、载玻片、染色缸等;
2.试剂:%胰蛋白酶、Giemsa染液、磷酸缓冲液等。
3.材料:小鼠染色体标本
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实验步骤
将老化七天的染色体标本放入60℃温箱中烤片2小时以上;
%的胰蛋白酶溶液中作用3---15秒;
取出后,GKN溶液漂冼15秒,Giemsa染色15分钟,冲洗,镜检。
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实验结果
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