大肠杆菌检测：大肠菌群测定操作细则(中英文对照版)重点.docx

大肠杆菌的检测：大肠菌群测定的操作细则
大肠菌群系指一群能发酵乳糖、 产酸产气、 需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 该菌 主要来于人畜粪便 ,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量 , 推断食品中有否污染 肠道致病菌的可能。
食品中大肠菌群数系以 100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。
设备和材料
温箱：36± 1C。 冰箱:0 〜4 C。 恒温水浴： ± C。 天平。
显微镜。 均质器或乳钵。 平皿:直径为 90mm。 试管。 吸管。 广 口瓶或三角烧瓶 ： 容量为 500mL。 玻璃珠： 直径约 5mm。 载玻片。 酒精灯。
试管架。
培养基和试剂
乳糖胆盐发酵管 ： 按 GB 中 规定。
伊红美蓝琼脂平板 ： 按 GB 中 规定。
乳糖发酵管 ： 按 GB 中 规定。
EC 肉汤：按 GB 中 规定。
磷酸盐缓冲稀释液 ： 按 GB 中 规定。
生理盐水。
革兰氏染色液 ：按 GB 中 规定。
检样稀释
(或 g)放于有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶 内(瓶内予置适当数量的玻璃珠 )或灭菌乳钵内 ,经充分振摇或研磨做成 1：10 的均匀稀释液。 固体检样最好用均质器 ,以 8 000-10 000 r/min 的速度处理 1min, 做成 1：10 的均匀稀释液。
:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试 管内 , 振摇试管混匀 , 做成 1：100 的稀释液。
，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支 1mL灭菌吸管。
根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计 ,选择三个稀释度 , 每个稀释度 ,接种 3管。
乳糖发酵试验
将待检样品接种于乳糖 胆盐发酵管内，接种量在1mL以上者，用双料乳糖胆盐发酵管,1mL及
1mL以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种 3管，置36± 1 C温箱内，培养24± 2h， 如所有乳糖胆盐发酵管都不产气 ， 则可报告为大肠菌群阴性 ， 如有产气者 ， 则按下列程序进 行。
分离培养
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上 ，置36± 1C温箱内，培养18-24h，然后取
出， 观察菌落形态 ， 并做革兰氏染色和证实试验。
证实试验
在上述平板上 ， 挑取可疑大肠菌群菌落 1-2 个进行革兰氏染色 ，同时接种乳糖发酵管 ，置 36± 1C温箱内培养24± 2h，观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆 菌， 即可报告为大肠菌群阳性。
报告
根据证实为大肠菌群阳性的管数 ，查MPN佥索表，报告每100mL(g)大肠菌群的MPN®。
4 粪大肠菌群 (faecal coliform)
（）转种于EC肉汤管内，置
±