蛙类斯氏离体心脏灌流.doc

姓名*** 系年级********* 学号*********** 科目动物生理学实验同组者*** 、*** 日期*********** 蛙类斯氏离体心脏灌流【实验目的】 1. 学****斯氏离体蛙心灌流法; 2. 了解心肌的生理特性; 3. 观察 Na +、K +、 Ca 2+ 离子等对离体心脏活动的影响。【实验原理】心肌具有自动节律性( autorhythmicity )收缩的特性,可以用人工灌流的方法,研究心脏活动的规律及特点;还可以观察灌流液成分的改变对离体心脏活动的影响。【实验材料】 1. 材料:蟾蜍。 2. 器具:常用手术器械,解剖盘,蛙板(木质) ,毁髓针,玻璃分针,手术剪,手术镊, 铁钉, 蛙心套管, 套管夹, 双凹夹, 滑轮, 蛙心夹, 支架, 双针形露丝刺激电极, 滴管, 小烧杯,棉线,张力传感器,生理信号采集系统。 3. 试剂:任氏液, 5 % NaCl 溶液, 1 % KCl 溶液, 2 % CaCl 2 溶液。【实验步骤】 1. 暴露动物心脏取一只蟾蜍, 双毁髓后背位置于蛙板上, 一手持手术镊提起胸骨后方的皮肤, 另一只手持手术剪剪开一个小口, 然后将剪刀由开口处伸向皮下, 向左、右两侧下颌角方向剪开皮肤。将皮肤掀向头端, 再用手术镊提起胸骨后方的腹肌, 在腹肌上剪一口, 将金冠剪紧贴体壁向前伸入(勿伤及心脏和血管) ,并沿皮肤切口方向剪开体壁,剪断左右乌喙骨和锁骨,使创口呈一倒三角形。一手持眼科镊,提起心包膜,另一手用眼科剪剪开心包膜,暴露心脏。 2. 斯氏蛙心插管仔细识别心脏周围的大血管。在左主动脉下方穿一线, 并打一活结备用。左手提起主动脉上的结扎线, 右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉壁上剪一斜口。选择大小适宜的蛙心套管,然后将成盛有少量(套管内 2~3cm 高度)任氏液(内含葡萄糖)的斯氏蛙心套管,由开口处插入动脉圆锥。当套管尖端到达动脉圆锥基部时,应将套管稍稍后退,使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进, 经主动脉瓣插入心室腔内( 于心室收缩时插入,但不可插得过深,以免心室壁堵住套管口) 。此时可见血液冲入套管,并使液面随心脏搏动而上下移动,表明操作成功(否则需退回并重新插入) 。用滴管吸取套管中的血液,更换新鲜任氏液。稳定住套管后, 轻轻提起备用线, 将左、右主动脉连同插入的套管用双线紧紧扎紧(不得漏夜) ,再将结线固定在套管的小玻璃钩上,然后剪断结扎线上方的血管。轻轻提起套管和心脏, 看清静脉窦的位置, 于静脉窦下方剪断有牵连的组织, 仅保留静脉窦与心脏的联系, 使心脏离体。( 切勿损伤静脉窦)。用任氏液反复冲洗心室内余血, 使套管内灌流液不再有残留血液。保持套管内液面高度一致( ~2cm ) ,即可进行实验。图1 斯氏蛙心插管法 3. 连接实验装置将插好离体心脏的套管固定在支架上, 用蛙心夹夹住少许心尖部的肌肉( 不可夹得过多, 以免因夹破心室而漏液) 。在将蛙心夹上的系线绕过一个滑轮与张力传感器相连。注意:勿使灌流液滴到传感器上。打开生理信号采集系统, 接通张力传感器输入通道。调节系线的拉力, 使心脏的收缩活动在显示屏上出现。调节显示器上心脏收缩曲线的幅度适中。调整扫描速度,使心搏曲线的幅度与宽度适中。图2 实验装置示意图 4. 实验观察(1 )记录正常心搏曲线。(2 )向套管内滴加 2-3 滴