课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 (2).ppt

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
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一、课题背景
1、尿素的利用
尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。
2、细菌利用尿素的原因
土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶
CO(NH2)
脲酶
+ CO2
NH3
+ H2O
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课题目的
①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌
②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样
的细菌
研究思路
㈠.筛选菌株
㈡.统计菌落数目
㈢.设置对照
一、课题背景
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1、实验室中微生物的筛选原理：
人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。
什么是选择性培养基？
在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
㈠.筛选菌株
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琼脂

尿素

葡萄糖

MgSO4`7H2O

NaH2PO4

KH2PO4
2、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：
①从物理性质看此培养基属于哪类？
固体培养基
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②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？
碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素
培养基的唯一氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖
3、培养基选择分解尿素的微生物的原理
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1、显微镜直接计数：
利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。
㈡.统计菌落数目：
不能区分死菌与活菌；
不适于对运动细菌的计数；
需要相对高的细菌浓度；
个体小的细菌在显微镜下难以观察；
缺点
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2、活菌计数法（间接计数法）
⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。
⑵常用方法：稀释涂布平板法。
每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M
其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。
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注意事项
①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。
②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。
③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。
因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
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设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
㈢.设置对照：
实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌
落数目的实验时，A同学从对应的106
倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌
落，但是其他同学在同样的稀释度下
只选择出大约50个菌落。分析其原因。
原因：⑴土样不