小鼠急性脑缺氧实验.doc

本文通过小鼠急性脑缺氧实验、大鼠大脑中动脉栓线法局灶性脑缺血(MCAO) 损伤模型、对脑血流量影响实验、抑制血小板聚集及血栓形成实验、小鼠不完全脑缺血模型、沙土鼠全脑缺血再灌注损伤等实验和模型,分别从扩张脑血管、抑制血小板聚集及血栓形成、抗水肿、抗缺血再灌注损伤、抗自由基和兴奋性氨基酸损伤等角度, 系统的研究了三七中人参三醇皂苷(PTS) 对缺血性脑中风的防治作用及其机制。方法 1. 小鼠急性脑缺氧实验小鼠 . 给药, 每天一次,共 3 次,末次给药后 30min 将小鼠逐只断头,立即按秒表记录小鼠断头后至张口喘气停止时间作为耐缺氧指标。 2. 大鼠大脑中动脉栓线法局灶性脑缺血(MCAO) 损伤模型雄性 SD 大鼠, . 预防给药两次, 每天一次, 造模前 . 给药 1次, 造模后 4h和 10h . 给药两次。模型建立: 分离、结扎右侧颈总动脉, 参照 Berdson 法用 4-0 尼龙线阻断大脑中动脉。造模成功能够存活 24h 的大鼠确定为最后实验对象, 并进行行为学评分后, 快速取右脑, 并切成三片, 将脑前部用于脑含水量测定, 中部用于脑梗死面积测定, 后部用于病理组织学检查。 3. 对脑血流量影响实验犬静脉滴注给药,分别在给药前和给药后 5、 10、 15、 30、 60、 120 以及 180min 测定平均动脉血压(MAP) 、心率(HR) 、脑血流量(CBF) 和脑血管阻力(CVR) 等指标。 4 .抑制血小板聚集及血栓形成实验抑制血小板聚集:大鼠 . 给药,共 3次, 每天 1次。于末次给药 30min 后, 分别自颈总动脉放血, 在血样中加入 5μl 已稀释的 ADP( 终浓度为 50μ mol / L) 反应 5min 后测定最大聚集度。抑制血栓形成:大鼠经 4 %戊巴比妥钠 . 麻醉,舌下静脉给药后 20min ,分离右侧颈总动脉和左侧颈外静脉。把插入丝线的聚乙烯管的两端分别插入右侧颈总动脉和左侧颈外静脉, 打开动脉夹开放血液 15min 后, 中断血流, 迅速取出聚乙烯管中的血栓, 在分析天平上称重, 求出血栓抑制率。5. 双侧颈总动脉结扎的不完全脑缺血模型给小鼠 . 给药,共3次, 每天 1次; 于末次给药后 30min , 麻醉后分离双侧颈总动脉, 各组经尾静脉注射 1 %伊文思蓝溶液, 并分别在注射 10min 后结扎双侧颈总动脉。在结扎 3h 后断头取出脑组织,称重后测脑组织内伊文思蓝含量并计算脑指数。6. 沙土鼠全脑缺血再灌注损伤模型采用结扎沙土鼠双侧颈总动脉 15min 再灌注 24h 制备全脑缺血再灌注损伤模型,动物随机分成假手术组、模型组、 PTS 30mg / kg 组、 PTS 60mg / kg 组、 PTS120mg / kg 组和阳性对照药血栓通注射液组。观察造模 24h 后 PTS 对沙土鼠脑组织超氧化物歧化酶(SOD) 、丙二醛(MDA) 、兴奋性氨基酸及病理组织学的影响。结果1. 小鼠急性脑缺氧实验结果提示, PTS 注射液 30mg / kg 以上剂量组给药后均能显著延长小鼠断头喘息时间,提示 PTS 注射液可提高小鼠脑耐急性缺氧的能力以增强对抗脑中风的能力。2. 大鼠大脑中动脉栓线法局灶性脑缺血(MCAO) 损伤模型实验提示: 一定剂量的