分子生物学课件.doc

分子生物学课件.doc分子生物学课件
篇一：2014分子生物学课件重点总结(一)
引物：是人工合成的两段寡核苷酸序列，一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补，另一个引物与感兴趣区域另一端的另一条DNA模板链互补。
Ct值：是PCR扩增过程中，扩增产物(荧光信号）到达阈值时所经过的扩增循环次数 基因诊断：应用分子生物学技术,从DNA/RNA
达状态从而对疾病作出诊断的技术 水平检测分析致病基因的存在,变异和表
RFLP：利用特定限制性识别位点进行基因分析的方法
基因诊断常用的技术有哪些？
（hybridization）
(allele specific oligonucleotide, ASO)
(restriction fragment length polymorphism, RFLP)分析
-PCR/单链构象多态性分析（PCR-Single-strand conformation polymorphism，PCR-SSCP）
（DNA sequence）
.6DNA芯片技术（DNA chip）
基因治疗：将外源性正常基因导入到病变细胞或体细胞中，以置换或增补缺陷基因的功能，从而达到治疗遗传性疾病或获得性疾病的目的。
基因治疗的策略有哪些?
一、针对致病基因而言：
（1）基因修正（gene correction）
对于致病基因中的异常碱基进行精确修复，使其恢复正常功能；
（2）基因替代（gene replacement）
用正常基因在原位替换致病基因，使细胞DNA完全恢复正常状态；
（3）基因增强（gene augmentation）
将正常基因导入患者体细胞内，使其整合到染色体中一起表达，以补偿缺陷基因的功能 ，但致病基因未去除；
（4）基因表达调节（modulation ）
指将特定的反义核酸、RNA干扰或核酶等技术抑制目的基因表达从而消除致病基因的作用。
二、针对非致病基因而言：
（1）***基因
这种基因导入受体细胞后可产生一种酶，它可将原无细胞毒性或低毒药物前体转化为细胞毒物质，将细胞受体细胞杀死，这种基因被称为“***基因”。***基因导入肿瘤细胞后，可将肿瘤细胞杀死。但对正常细胞则无伤害作用。
（2）免疫基因治疗
将某些细胞因子（IL-2、GM-CSF等）基因导入肿瘤患者体内，以增强患者的抵抗力。
（3）耐药基因治疗
在肿瘤化疗过程中， 把产生抗药物毒性的基因导入患者体内，从而使患者能耐受
更大剂量的化疗。
（4）More??
基因治疗的基本程序：
1. 目的基因的选择和获取
2. 目的基因与转运载体结合
3. 靶细胞的确认
4. 载体携带外源基因进入细胞
5. 外源基因的整合
6. 外源基因的表达及检测
7. 治疗作用及稳定性、安全性评价
克隆：一种无性繁殖技术。指一个亲本细胞产生成千上万个相同细胞组成的群体的过程。 DNA克隆：应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质（同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA）与载体DNA接合成一具有自我复制能力的DNA分子——复制子(replicon)，继而通过转化或转染宿主细胞，筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增提取获得大量同一DNA分子，也称基因克隆或重组DNA (recombinant DNA) 。 基因工程(genetic engineering)：有目的的通过基因克隆技术，人为的操作改造基因，以改变生物的遗传性状的系列过程。
基因克隆的技术路线：
：分离制备目的DN***段和载体
：目的DNA与载体的剪切
：目的DNA与载体的连接
：重组DNA分子转化宿主细胞
：筛选阳性克隆，大量扩增
基因克隆的基本原理：






限制性核酸内切酶（限制酶）：限制性核酸内切酶(restriction endonuclease, RE)是识别DNA的特异序列, 并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。
目的基因的分离：
1、直接从染色体DNA中分离
2、人工合成
3、通过mRNA反转录合成 cDNA
4、从基因组DNA文库获取目的基因
5、从cDNA文库获取目的基因
6、PCR扩增目的基因
7、索取
载体：能携带目的基因进入宿主细胞